本文關(guān)鍵詞：電刺激頻率對犬急性房顫模型神經(jīng)體液的影響　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一章頻率依賴電刺激誘發(fā)犬急性AF模型的制作方法學(xué)1.研究目的心房顫動(Atrial fibrillation, AF)是最常見的房性心律失常,可引起血流動力學(xué)紊亂,增加擴(kuò)張型心肌病、心力衰竭和心肌梗死等心臟疾病患者的死亡率。AF易并發(fā)心房附壁血栓、腦梗死和肺栓塞等。臨床常將AF分為陣發(fā)性、持續(xù)性和永久性3類,陣發(fā)性AF隨著病情的加重和病程的遷延可發(fā)展為持續(xù)性。同時研究證實AF具有年齡易感性、種族差異和地域差異。我國AF發(fā)病率約0.65%,高于國際水平。AF治療以藥物為主,藥物難治性AF常采取射頻消融手術(shù)治療,但仍有較高復(fù)發(fā)率。因此,對AF發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步研究,尋找更有效的臨床治療方法顯得尤為重要。本章通過3種不同電刺激頻率起搏右心房,對比分析3組間心房肌和左肺上下靜脈電生理改變,探討500次／分鐘(Bit per minute, bpm)和1000bpm起搏誘發(fā)的急性犬AF模型是否存在電重構(gòu)差異。2.研究方法實驗用犬隨機(jī)分為3組。A組：500bpm右心房起搏,n=8；B組：1000bpm右心房起搏,n=8；C組：高于自身基礎(chǔ)心率5%右心房起搏,n=4。動物麻醉后,氣管插管,無創(chuàng)呼吸機(jī)輔助呼吸,監(jiān)測生命體征。于右心房置放4級電極,左肺上下靜脈縫置10級電極,用多道生理記錄儀Lead-7000進(jìn)行起搏刺激和電生理數(shù)據(jù)記錄。測定3組右心房、左肺上下靜脈起搏前和起搏后2h、4h、6h、8h、 10h和12h的AF誘發(fā)率、持續(xù)時間、右心房與左肺上下靜脈的有效不應(yīng)期(Effective refractory period, ERP),并計算ERP離散度。3.研究結(jié)果20條犬中19條犬完成AF的模型制作。其中1條犬在進(jìn)行1000bpm起搏過程中出現(xiàn)室顫、血壓下降及血氧飽和度降低,予以電復(fù)律和腎上腺素靜滴等措施,搶救無效,死亡。3.1 AF誘發(fā)率比較：右心房的AF誘發(fā)率在3組間存在分組效應(yīng),Wald x2 =81.987, P=0.000。A組vs C組,Wald x2=11.077, P=0.001;B組vs C組,Wald x2=71.465, P=0.000;A組vs B組,Wald x2=26.276, P=0.000,12小時內(nèi)的重復(fù)測量時間比較提示存在時間效應(yīng),Wald x2=1138.386, P=0.000。A組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。B組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。C組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。左上肺靜脈的AF誘發(fā)率存在分組效應(yīng),Wald x2=74.383, P=0.000。A組vsC組,Wald x2=13.037, P=0.000;B組vs C組,Wald x2=71.808, P=0.000; A組vs B組,Wald x2=12.628, P=0.000。12小時內(nèi)重復(fù)測量時間比較提示存在時間效應(yīng),Wald x2=562.583, P=0.000=A組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、6h、 8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。B組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、 6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。C組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。左下肺靜脈的AF誘發(fā)率存在分組效應(yīng),Wald χ2=11.374, P=0.003。A組vsC組,Wald χ2=0.267, P=0.605;B組vs C組,Wald χ2=2.718, P=0.099;A組vsB組,Wald χ2=10.929, P=0.001.12小時內(nèi)重復(fù)測量時間比較提示存在時間效應(yīng),Wald χ2=824.580, P=0.000。組內(nèi)不同時間點(diǎn)間比較結(jié)果：A組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。B組內(nèi)各時間點(diǎn)與Oh比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。C組內(nèi)各時間點(diǎn)與Oh比較4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。3.2 AF持續(xù)時間比較：右心房的AF持續(xù)時間在3組間具有分組效應(yīng),Waldx2=101.069,P=0.000。A組vs C組,Wald χ2=41.633, P=0.000;B組vs C組,Wald χ2=101.036, P=0.000;A組vs B組,Wald χ2=3.680, P=0.055。12小時內(nèi)重復(fù)測量時間比較提示存在時間效應(yīng),Wald χ2=2292.418, P=0.000。A組內(nèi)各時間點(diǎn)與Oh比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。B組內(nèi)各時間點(diǎn)與Oh比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。C組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。左上肺靜脈的AF持續(xù)時間在3組間具有分組效應(yīng),Wald χ2=82.645, P=0.000。A組vs C組,Wald χ2=20.431, P=0.000;B組vs C組Wald χ2=80.467,P=0.000;A組vs B組,Wald χ2=4.843, P=0.028。12小時內(nèi)的重復(fù)測量時間比較提示存在時間效應(yīng),Wald χ2=3357.463, P=0.000。A組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。B組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。C組內(nèi)各時間點(diǎn)與Oh比較4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。左下肺靜脈的AF持續(xù)時間在3組間具有分組效應(yīng),Wald χ2=11.806,P=0.003。A組vs C組,Wald χ2=3.418, P=0.064;B組vs C組,Wald χ2=11.799, P=0.001;A組vs B組,Wald χ2=1.268,P=0.260。12小時內(nèi)重復(fù)測量時間比較提示存在時間效應(yīng),Wald χ2=1344.760, P=0.000。A組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。B組內(nèi)各時間點(diǎn)與Oh比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。C組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。3.3右心房和左肺上下靜脈ERP比較：右心房的ERP縮短在3組間具有分組效應(yīng),Wald χ2=200.818, P=0.000。A組vs C組,Wald χ2=30.563, P=0.000;B組vs C組,Wald χ2=192.706,P=0.000;A組vs B組,Wald χ2=35.928, P=0.000.12小時內(nèi)重復(fù)測量時間比較提示存在時間效應(yīng)：Wald χ2=881.937, P=0.000。A組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。B組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。C組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。左上肺靜脈的ERP縮短在3組間具有分組效應(yīng),Wald χ2=13.599, P=0.001.A組vs C組,Wald χ2=1506,P=0.220;B組vs C組,Wald χ2=10.472,P=0.001;A組vs B組,Wald χ2=9.625, P=0.002。12小時內(nèi)的重復(fù)測量時間比較提示存在時間效應(yīng),Wald χ2=825.339, P=0.000,A組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、 6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。B組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、 4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。C組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。左下肺靜脈的ERP縮短在3組間不具有分組效應(yīng),Wald χ2=1.893,P=0.388.12小時內(nèi)重復(fù)測量時間比較提示存在時間效應(yīng),Wald χ2=1249.679, P=0.000。A組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。B組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。C組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。3.4右心房和左肺上下靜脈ERP離散度比較：3組間存在分組效應(yīng),Wald χ2=27.342, P=0.000。A組vs C組,Wald χ2=26.575, P=0.000;B組vs C組,Wald χ2=10.975, P=0.001;A組vs C組,Wald χ2=0.324, P=0.569。12小時內(nèi)重復(fù)測量時間比較提示存在時間效應(yīng),Wald χ2=18.363, P=0.0048。A組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較10h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。C組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、4h、6h、8h、10h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。4.研究結(jié)論(1)3種起搏頻率均成功誘發(fā)AF,且出現(xiàn)不同程度的心房電重構(gòu)。AF的誘發(fā)率和維持時間隨著刺激時間的延長呈現(xiàn)增加趨勢。ERP在12小時刺激過程中總體呈現(xiàn)縮短趨勢,在6-8小時期間出現(xiàn)最低值,隨后有一定程度的延長。(2)1000bpm右心房起搏引起的電生理改變總體上較500bpm和高于自身基礎(chǔ)心率5%的起搏刺激明顯,這種改變除心房電重構(gòu)外,可能還有神經(jīng)重構(gòu)的參與。推測3組間存在不同程度的神經(jīng)重構(gòu),且1000bpm起搏組較另2組顯著。第二章頻率依賴電刺激誘發(fā)犬急性AF模型的ANS變化1.研究目的心臟受外在自主神經(jīng)和內(nèi)在自主神經(jīng)共同調(diào)控,自主神經(jīng)由交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)組成,已有大量研究表明,心臟自主神經(jīng)在AF的發(fā)生、發(fā)展和維持中占有重要地位。去甲腎上腺素(Norepinephrine, NE)和乙酰膽堿(Acetylcholine, Ach)作為自主神經(jīng)的主要神經(jīng)遞質(zhì),發(fā)揮著調(diào)節(jié)心臟的作用。動物實驗提示,AF的動物模型中,神經(jīng)遞質(zhì)的濃度存在時間依賴性變化。臨床研究也證實,AF患者的血液NE和Ach濃度與正常水平具有差異。本部分主要通過測定AF模型的神經(jīng)遞質(zhì)在血清和右心房組織中的含量,并與模型的神經(jīng)信號分析結(jié)果進(jìn)行趨勢比較,探討500bpm和1000bpm兩種頻率誘發(fā)的犬急性AF是否存在自主神經(jīng)激活差異,以及造成差異的可能機(jī)制。2.研究方法實驗用犬隨機(jī)分為3組。A組：500bpm右心房刺激,n=8；B組：1000bpm右心房刺激,n=8；C組：高于自身基礎(chǔ)心率5%右心房起搏,n-=4。動物麻醉后,氣管插管,無創(chuàng)呼吸機(jī)輔助呼吸,監(jiān)測生命體征。于右心房置放4級電極,左肺上下靜脈縫置10級電極,采用多道電生理記錄儀Lead-7000進(jìn)行起搏刺激和電生理數(shù)據(jù)記錄。測定3組右心房和左肺上下靜脈起搏前與起搏后2h、 4h、6h、 8h、10h、和12h的AF誘發(fā)率、持續(xù)時間、右心房和左肺上下靜脈的ERP,并計算ERP離散度。檢測3組外周靜脈血清中刺激前與刺激后1h、2h、3h、4h、5h、 6h、7h、8h、9h、10h、11h和12h的NE和Ach含量,同時測定右心房組織中神經(jīng)遞質(zhì)的含量。3.研究結(jié)果20條犬中19條犬完成AF的模型制作。其中1條犬在進(jìn)行1000bpm起搏過程中出現(xiàn)室顫、血壓下降及血氧飽和度降低,予以電復(fù)律和腎上腺素靜滴等措施,搶救無效,死亡。3.1血清NE濃度變化：3組間不具有分組效應(yīng),Wald χ2=5.555, P=0.062,12小時內(nèi)重復(fù)測量時間比較提示存在時間效應(yīng),Wald χ2=119.689, P=0.000。A組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較3h、4h、5h、8h、9h和10h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。B組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較1h、2h、3h、4h、5h、8h、11h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。C組內(nèi)各時間點(diǎn)與Oh比較2h、3h、4h和5h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。3.2血清Ach濃度變化：3組間具有分組效應(yīng),Wald χ2=13.913, P=0.001。A組vs C組比較,Wald χ2=0.097, P=0.755;B組vs C組比較,Wald χ2=6.270, P=0.012;B組vs A組比較,Wald χ2=11.029, P=0.001。12小時內(nèi)重復(fù)測量時間比較提示存在時間效應(yīng),Wald χ2=28.388, P=0.005。A組內(nèi)各時間點(diǎn)與Oh比較1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、口9h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。B組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較1h、2h、3h、4h、5h、6h、8h、10h、11h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。C組內(nèi)各時間點(diǎn)與Oh比較1h、3h、4h、5h、6h、10h、11h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。313右心房組織中NE和Ach含量比較：A組、B組vs C組的NE含量均具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05,B組vsA組亦具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。B組vsA組、C組的Ach含量均具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05,A組vs C組不具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。4.研究結(jié)論(1)3組血清中NE和Ach的含量隨著刺激時間的延長,出現(xiàn)具有統(tǒng)計學(xué)意義的濃度變化,提示測定AF時血清NE和Ach水平,具有反應(yīng)AF持續(xù)時間和AF神經(jīng)調(diào)控變化的可能性。(2)1000bpm組的NE和Ach含量不論是血清中,還是心肌組織中,均明顯高于另2組,提示1000bpm起搏誘發(fā)AF發(fā)生發(fā)展的機(jī)制與神經(jīng)激活密切相關(guān)。(3)500bpm組和1000bpm組血清中NE和Ach的濃度變化與神經(jīng)信號放電變化趨勢一致,進(jìn)一步證實自主神經(jīng)介導(dǎo)了AF模型的病理生理學(xué)變化。(4)500bpm起搏誘發(fā)AF發(fā)生的機(jī)制以心房肌電重構(gòu)為主,1000bpm起搏AF發(fā)生的機(jī)制除心房肌電重構(gòu)外,還有明顯的自主神經(jīng)激活,提示臨床治療快頻率AF時需考慮增加平衡自主神經(jīng)功能的治療方案。第三章頻率依賴電刺激誘發(fā)犬急性AF模型的RAS變化1.研究目的腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-angiotensin system, RAS)作為重要的神經(jīng)體液內(nèi)分泌系統(tǒng),參與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展和維持,如高血壓病、心肌梗死和心力衰竭等。大量研究證實血管緊張素Ⅱ (AngiotensinⅡ, AngⅡ)、血管緊張素II受體1(Angiotensin Ⅱtype 1 receptor, ATiR)和血管緊張素II受體2(Angiotensin II type 2 receptor, AT2R)在AF的病程中起著重要作用,參與心房結(jié)構(gòu)重構(gòu),促進(jìn)纖維化和炎癥因子分泌等。本部分主要研究血清和右心房組織中腎素和AngⅡ的含量和RNA表達(dá)量,以及AT1R和AT2R的蛋白量和RNA表達(dá)量,探討3組間是否存在RAS激活差異,以及造成差異的可能機(jī)制。2.研究方法實驗用犬隨機(jī)分為3組。A組：500bpm右心房刺激,n=8；B組：1000bpm右心房刺激,n=8；C組：高于自身基礎(chǔ)心率5%右心房起搏,n=4。動物麻醉后,氣管插管,無創(chuàng)呼吸機(jī)輔助呼吸,監(jiān)測生命體征。于右心房置放4級電極,左肺上下靜脈縫置10級電極,采用多道電生理記錄儀Lead-7000進(jìn)行起搏刺激和電生理數(shù)據(jù)記錄。測定3組右心房、左肺上下靜脈起搏前和起搏后2h、4h、 6h, 8h、10h和12h的AF誘發(fā)率、持續(xù)時間、右心房與左肺上下靜脈的ERP,并計算ERP離散度。檢測3組外周靜脈血清刺激前和刺激后1h、2h、3h、4h、5h、 6h、7h、8h、9h、10h、11h和12h腎素和AngⅡ的含量,同時采用Western Blotting和PCR測定右心房組織中腎素、AngⅡ、AT1R和AT2R的蛋白含量和RNA表達(dá)。3.研究結(jié)果20條犬中19條犬完成AF的模型制作。其中1條犬在進(jìn)行1000bpm刺激過程中出現(xiàn)室顫、血壓下降及血氧飽和度降低。予以電復(fù)律和腎上腺素靜滴等措施,搶救無效,死亡。3.1血清腎素濃度比較：3組間具有分組效應(yīng),Wald χ2= 25.018, P=0.000,A組vs C組,Wald χ2= 0.066, P=0.797;B組vs C組,Wald χ2=18.524,P=0.000;B組vs A組,Wald χ2= 9.546, P=0.002。12小時內(nèi)重復(fù)測量時間比較提示存在時間效應(yīng),Wald χ2=37.132, P=0.000。A組內(nèi)各時間點(diǎn)與Oh比較1h、2h、3h、 4h、5h、6h、9h、10h和11h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。B組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較2h、3h、4h、7h、8h、11h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。C組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較4h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。3.2血清AngⅡ濃度比較：3組間不具有分組效應(yīng),Wald χ2=2.426, P=0.297.12小時內(nèi)重復(fù)測量時間比較提示存在時間效應(yīng),Wald χ2=356.198, P=0.000。A組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。B組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、 9h、10h、11h和12h具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。C組內(nèi)各時間點(diǎn)與0h比較均無統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。3.33組右心房組織Western Blot結(jié)果比較：與C組相比,腎素、Ang Ⅱ、AT1R和AT2R這4個目標(biāo)蛋白在A組和B組的心肌含量均有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。B組和A組相比亦具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。3.43組心肌組織PCR結(jié)果比較：與C組相比,腎素與AngⅡ的RNA表達(dá)量在A組和B組具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05,B組和A組比較亦具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。B組AT1R的RNA表達(dá)量與A組、C組進(jìn)行比較均具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05,A組和C組之間不具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。AT2R在C組中RNA的表達(dá)量與A組和B組相比均不具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05,但B組與A組之間具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。4.研究結(jié)論(1)1000bpm起搏頻率引起的RAS變化較500bpm和高于自身基礎(chǔ)心率5%起搏明顯,提示1000bpm右心房起搏RAS系統(tǒng)活動增強(qiáng)。(2)腎素在血清的變化體現(xiàn)出一定是時間依賴性,而腎素和Ang II在血清和組織中的含量存在差異可能是受酶學(xué)反應(yīng)和心肌局部RAS的影響。(3)AT1R和AT2R的翻譯與表達(dá)在500bpm和1000bpm中存在差異,提示以不同頻率快速起搏RA所產(chǎn)生的AngⅡ受體變化是不同的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R541.75;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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1 周自強(qiáng),胡大一,陳捷,張仁漢,李奎寶,趙秀麗;中國心房顫動現(xiàn)狀的流行病學(xué)研究[J];中華內(nèi)科雜志;2004年07期

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本文編號：1403933