本文關(guān)鍵詞：大鼠T細(xì)胞源性exosome提取方法比較　出處：《重慶醫(yī)學(xué)》2013年29期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的采用3種方法從大鼠T細(xì)胞培養(yǎng)上清中提取純化exosome,以獲取高質(zhì)量的exosome。方法分別采用ExoQuick Precipitation提取法、超濾密度梯度離心法、差速離心法提取T細(xì)胞培養(yǎng)上清中的exosome。利用透射電鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,2,2-聯(lián)喹啉-4,4-二甲酸二鈉(BCA)法進(jìn)行蛋白定量,十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析蛋白表達(dá)的差異,Western blotting檢測(cè)白細(xì)胞介素2(IL-2)的表達(dá)。結(jié)果 3種方法均可提取出exosome;ExoQuick Precipitation提取法、超濾密度梯度離心法所得樣本濃度顯著高于差速離心法所得樣本濃度(P0.05);SDS-PAGE結(jié)果顯示3種方法所得樣本具有蛋白表達(dá)強(qiáng)度的差異;Western blotting顯示3種方法所得樣本均表達(dá)IL-2。結(jié)論 ExoQuick Precipitation提取法、超濾密度梯度離心法可獲得高純度、無(wú)蛋白丟失的exosome樣本。
[Abstract]:Objective to develop the extraction and purification of exosome in supernatant from rat T cells by 3 methods, in order to obtain high quality exosome. methods respectively using ExoQuick Precipitation extraction, ultrafiltration by density gradient centrifugation. The extraction of T in cell culture supernatant by exosome. transmission electron microscope was used to observe the morphology of differential centrifugation, 2,2- biquinolyl two formic acid and two -4,4- sodium (BCA) method for quantitative protein, twelve dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis of differences in protein expression, Western blotting detection of interleukin 2 (IL-2) expression. Results of the 3 methods can extract exosome; ExoQuick Precipitation extraction method, the sample concentration was significantly higher than that by density gradient centrifugation and ultrafiltration differential centrifugation of the sample concentration (P0.05); SDS-PAGE results showed that the samples of the 3 kinds of methods with the difference of expression intensity of Western protein; blotting 3 Methods the samples were IL-2. expression conclusion ExoQuick Precipitation extraction, ultrafiltration and density gradient centrifugation with high purity can be obtained, without loss of protein exosome samples.

【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院泌尿外科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30872580)
【分類號(hào)】：R-332
【正文快照】： Exosome是一種起源于內(nèi)吞體系統(tǒng)并被排出胞外的膜性囊泡,直徑在30~100nm[1],含有大量與其來(lái)源相關(guān)的特異性蛋白,并由此發(fā)揮不同的功能[2]。T淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要組成部分,并且不同的亞群具有各異的免疫學(xué)功能。例如CD4+CD25+Terg細(xì)胞具有誘導(dǎo)免疫耐受的作用[3];而接觸抗

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本文編號(hào)：1394242