本文關(guān)鍵詞：人抗凝血酶Ⅲ的表達(dá)及其抗血清的制備　出處：《細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志》2013年02期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 抗凝血酶Ⅲ 原核表達(dá) 檢測(cè) 抗血清

【摘要】：目的用大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)重組的抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ),制備其抗血清并測(cè)定效價(jià)。方法利用基因克隆技術(shù)獲得AT-Ⅲ基因片段,構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET32a(+)-AT-Ⅲ,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)、蛋白純化并免疫兔,間接ELISA、Western blot法檢測(cè)抗血清。結(jié)果 SDS-PAGE、Western blot法檢測(cè)原核表達(dá)蛋白結(jié)果顯示,在相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)77 000附近出現(xiàn)特異性條帶。對(duì)該融合蛋白進(jìn)行分離純化后免疫新西蘭兔,制備AT-Ⅲ抗血清,間接ELISA方法檢測(cè)抗血清的最高效價(jià)可達(dá)到1∶12 800,Western blot分析表明抗血清可與293T、CHO細(xì)胞表達(dá)的AT-Ⅲ蛋白及AT-Ⅲ蛋白純品特異性結(jié)合。結(jié)論成功制備了人抗凝血酶Ⅲ抗血清。
[Abstract]:Objective to express recombinant Escherichia coli with antithrombin III (AT- III) system, the preparation of its antiserum titer. And determination method for obtaining AT- III gene fragment by gene cloning and construction of prokaryotic expression plasmid pET32a (+) -AT- III, transformed into Escherichia coli BL21 competent cells, IPTG expression, protein purification and immune rabbit. Indirect ELISA detection method. Results SDS-PAGE blot Western antiserum, Western blot assay showed that the prokaryotic expression protein, with a relative molecular mass (Mr) near 77000 specific bands. The fusion protein was isolated and purified by New Zealand rabbits, preparation of AT- III antiserum, the highest titer of indirect ELISA for the detection of antiserum can reach 1 to 12800, Western blot analysis showed that the antiserum with 293T, combined with AT- and AT- 3 protein 3 protein purified specific CHO cells. Conclusion the successful preparation of human antithrombin III anti blood Clear.

【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院奶牛研究中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31272586) 國(guó)家轉(zhuǎn)基因重大專項(xiàng)(2009ZX08007-006B,2011ZX08007-002,2011ZX08008-004) 山東省青年自然科學(xué)基金(ZR2010ZR029) 山東省自然基金(ZR2010CM012) 濟(jì)南市高校院所自主創(chuàng)新計(jì)劃(201004027)
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 人抗凝血酶Ⅲ(antithrombin-Ⅲ,AT-Ⅲ)是一類相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)約為58 000的糖蛋白,由432個(gè)氨基酸殘基組成,含糖量約10%。天然AT-Ⅲ以α、β兩種形式存在,其中90%為α形式(即完全糖基化)[1-3]。AT-Ⅲ是由肝細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的絲氨酸蛋白酶抑制劑(serine protease inhibit

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 趙維蒞;抗凝血酶制劑的臨床應(yīng)用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊(cè);1999年02期

2 馮秋月;李偉靜;賀敏;石曉月;喬志新;楊曉琮;程宏;張公慶;王婧;宮寧;王璇琳;于群;;重組人抗凝血酶發(fā)酵條件的優(yōu)化[J];生物技術(shù)通訊;2011年05期

3 陳祥;張成全;徐正中;孟闖;黃金林;潘志明;焦新安;;重組牛白細(xì)胞介素4的原核表達(dá)及其單克隆抗體研制[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年06期

4 李軍;王曉敏;竇忠英;李勇;;Nanog基因的原核表達(dá)及抗體制備[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年07期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 韋傳寶;賈玉成;杜宇;;芋花葉病毒檢測(cè)試劑盒的研制[J];安徽大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2009年04期

2 張運(yùn)鋒;黃光和;李希國(guó);譚學(xué)林;;普通菜豆農(nóng)藝性狀相關(guān)性分析及主成分分析[J];安徽農(nóng)學(xué)通報(bào);2008年07期

3 尹榮煥;尹榮蘭;楊玉英;潘樹德;蘇振山;白文林;;PCR技術(shù)檢測(cè)熟肉制品中沙門氏菌的研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年02期

4 韓芬霞;;豬肝臟基因組DNA提取與純化的研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年16期

5 劉開華;王三保;邢淑婕;;食品中金黃色葡萄球菌的PCR檢測(cè)[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年02期

6 劉愛榮;陳雙臣;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)Ds轉(zhuǎn)座因子的黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年23期

7 張衛(wèi)林;趙晶;李芬;;冰浴時(shí)間對(duì)氯化鈣轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化效率的影響[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年30期

8 江春雨;郭澤坤;;人泛素基因原核表達(dá)載體構(gòu)建、表達(dá)及鑒定[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年02期

9 陳麗梅;殷飛;李昆志;魏云林;林連兵;;耐受甲醛并能利用甲醇細(xì)菌的分離及其基因組文庫(kù)的構(gòu)建[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年03期

10 黃劍飛;李健;劉淇;王群;;納豆芽孢桿菌對(duì)健康和鰻弧菌感染牙鲆腸粘液粘附的研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 徐義流;張紹鈴;;梨活體花柱內(nèi)花粉RNA的降解[A];食品安全的理論與實(shí)踐——安徽食品安全博士科技論壇論文集[C];2005年

2 陳秀蓉;楊成德;賈迎春;;西瓜細(xì)菌性果斑病菌的分離鑒定[A];節(jié)能環(huán)保 和諧發(fā)展——2007中國(guó)科協(xié)年會(huì)論文集（三）[C];2007年

3 李智媛;屈淑平;崔崇士;;美洲南瓜AFLP反應(yīng)體系的優(yōu)化與建立[A];中國(guó)園藝學(xué)會(huì)南瓜分會(huì)西南地區(qū)南瓜產(chǎn)業(yè)化發(fā)展研討會(huì)暨第三屆會(huì)員代表大會(huì)論文集[C];2009年

4 李青;鐘青萍;王麗;;海產(chǎn)品中副溶血弧菌的PCR快速檢測(cè)方法的建立[A];“食品加工與安全”學(xué)術(shù)研討會(huì)暨2010年廣東省食品學(xué)會(huì)年會(huì)論文集[C];2010年

5 談安群;鐘廣炎;江東;閆虎斌;王淼;;用抑制性消減雜交法分離興春i*柑干旱脅迫誘導(dǎo)表達(dá)的cDNA[A];中國(guó)柑橘科技創(chuàng)新與產(chǎn)業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略論壇暨中國(guó)柑橘學(xué)會(huì)2007年年會(huì)論文集[C];2007年

6 魏蘭蘭;谷鴻喜;;16型人乳頭瘤病毒衣殼蛋白在真核細(xì)胞中的表達(dá)[A];慶祝黑龍江省免疫學(xué)會(huì)成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

7 周興;張居農(nóng);;蚓激酶重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLN-BCP-LK~R的構(gòu)建及其在奶牛乳腺組織中的表達(dá)[A];中國(guó)奶牛協(xié)會(huì)2007年會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2007年

8 魏慶寬;李瑾;傅婷霞;柏雪蓮;崔勇;王用斌;張佃波;王洪法;付斌;劉玉冰;宰德福;黃炳成;劉克義;韓廣東;;抗弓形蟲感染DNA疫苗的研究[A];山東預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)第二屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

9 楊忠義;曹永生;蘇艷;劉曉利;李華惠;盧義宣;;中國(guó)栽培稻的秈稻和粳稻分類及方法(綜述)[A];云南省作物學(xué)會(huì)2004—2006年優(yōu)秀論文選集[C];2006年

10 烏斯?jié)M·依米提;古麗斯瑪依;張永輝;樊振;;高效乳酸菌對(duì)青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的改善效果[A];第三屆全國(guó)微生物資源學(xué)術(shù)暨國(guó)家微生物資源平臺(tái)運(yùn)行服務(wù)研討會(huì)會(huì)議論文摘要集[C];2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張青嬋;A亞群禽白血病病毒不同分離株的基因組和生物學(xué)特性比較[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 張升祥;家蠶氣味結(jié)合蛋白基因的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

3 李振東;東祁連山高寒草地優(yōu)勢(shì)植物內(nèi)生細(xì)菌多樣性研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 姚小磊;基于TGF-β1與Bcl-2的抗干眼癥中藥高通量篩選體系的建立[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2010年

5 宋翠平;H5N1禽流感和鵝Ⅰ型副粘病毒分離株的生物學(xué)特性及感染性的研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2010年

6 溫武軍;鯉抗菌肽基因的克隆及其功能研究[D];山東師范大學(xué);2011年

7 郭忠鵬;代謝工程改善工業(yè)酒精酵母發(fā)酵性能[D];江南大學(xué);2011年

8 郭洪亮;siRNA-smad3對(duì)缺血性腦損傷ActA/smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[D];吉林大學(xué);2011年

9 朱永濤;Cytophaga hutchinsonii纖維素降解機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2011年

10 孫勇;hITF基因治療腸源性感染的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 鄭瑜;銀杏核心種質(zhì)構(gòu)建初探[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 曹晶;風(fēng)疹病毒（RV）包膜糖蛋白E1特異基因片段的原核表達(dá)[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

3 羅素娟;家蠶細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶家族(CDK)的研究[D];浙江理工大學(xué);2010年

4 陳曉平;家蠶30kD載脂蛋白19G1的表達(dá)和功能的初步研究[D];浙江理工大學(xué);2010年

5 劉靜;家蠶BmycaCR基因的原核表達(dá)和亞細(xì)胞定位研究[D];浙江理工大學(xué);2010年

6 葛紅秀;家蠶鈣磷蛋白（BmCAPS）的原核表達(dá)及定位分析[D];浙江理工大學(xué);2010年

7 梁莉惠;家蠶BmCH基因的原核表達(dá)和亞細(xì)胞定位研究[D];浙江理工大學(xué);2010年

8 梁曉艷;人脂聯(lián)素基因的原核表達(dá)純化、抗體制備及應(yīng)用[D];鄭州大學(xué);2010年

9 朱美真;山東某地方品系雞雞胚中禽白血病病毒的分離及序列分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 霍鳳梅;洋蔥種質(zhì)資源遺傳多樣性的SRAP分析與查爾酮合成酶基因的分子克隆與表達(dá)研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 許國(guó)雙;陳香美;孫雪峰;吳鏑;嚴(yán)泉?jiǎng)?師鎖柱;洪權(quán);呂揚(yáng);;小鼠抗人Nanog多克隆抗體的制備及其鑒定[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2006年05期

2 查宏賢;劉罡;張晨;王彥云;衛(wèi)正國(guó);李兵;陳玉華;許雅香;沈衛(wèi)德;;家蠶絲氨酸蛋白酶抑制劑4(serpin-4)的基因克隆、原核表達(dá)和多克隆抗體制備[J];昆蟲學(xué)報(bào);2011年06期

3 單麗偉;唐如春;劉三陽(yáng);范三紅;郭藹光;;小麥種子過氧化物酶WP1基因的原核表達(dá)、純化及多克隆抗體制備[J];生物工程學(xué)報(bào);2011年01期

4 趙興旺;劉冉冉;鄭麥青;文杰;陳繼蘭;趙桂蘋;;雞髓樣分化因子88的原核表達(dá)及單克隆抗體制備[J];生物技術(shù)通訊;2011年06期

5 趙一t，

本文編號(hào)：1378593