本文關鍵詞：人抗凝血酶Ⅲ的表達及其抗血清的制備　出處：《細胞與分子免疫學雜志》2013年02期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的用大腸桿菌系統(tǒng)表達重組的抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ),制備其抗血清并測定效價。方法利用基因克隆技術獲得AT-Ⅲ基因片段,構建原核表達質粒pET32a(+)-AT-Ⅲ,轉化大腸桿菌BL21感受態(tài)細胞,IPTG誘導表達、蛋白純化并免疫兔,間接ELISA、Western blot法檢測抗血清。結果 SDS-PAGE、Western blot法檢測原核表達蛋白結果顯示,在相對分子質量(Mr)77 000附近出現(xiàn)特異性條帶。對該融合蛋白進行分離純化后免疫新西蘭兔,制備AT-Ⅲ抗血清,間接ELISA方法檢測抗血清的最高效價可達到1∶12 800,Western blot分析表明抗血清可與293T、CHO細胞表達的AT-Ⅲ蛋白及AT-Ⅲ蛋白純品特異性結合。結論成功制備了人抗凝血酶Ⅲ抗血清。
[Abstract]:Objective to express recombinant Escherichia coli with antithrombin III (AT- III) system, the preparation of its antiserum titer. And determination method for obtaining AT- III gene fragment by gene cloning and construction of prokaryotic expression plasmid pET32a (+) -AT- III, transformed into Escherichia coli BL21 competent cells, IPTG expression, protein purification and immune rabbit. Indirect ELISA detection method. Results SDS-PAGE blot Western antiserum, Western blot assay showed that the prokaryotic expression protein, with a relative molecular mass (Mr) near 77000 specific bands. The fusion protein was isolated and purified by New Zealand rabbits, preparation of AT- III antiserum, the highest titer of indirect ELISA for the detection of antiserum can reach 1 to 12800, Western blot analysis showed that the antiserum with 293T, combined with AT- and AT- 3 protein 3 protein purified specific CHO cells. Conclusion the successful preparation of human antithrombin III anti blood Clear.

【作者單位】： 東北農業(yè)大學生命科學學院;山東省農業(yè)科學院奶牛研究中心;
【基金】：國家自然科學基金(31272586) 國家轉基因重大專項(2009ZX08007-006B,2011ZX08007-002,2011ZX08008-004) 山東省青年自然科學基金(ZR2010ZR029) 山東省自然基金(ZR2010CM012) 濟南市高校院所自主創(chuàng)新計劃(201004027)
【分類號】：R346
【正文快照】： 人抗凝血酶Ⅲ(antithrombin-Ⅲ,AT-Ⅲ)是一類相對分子質量(Mr)約為58 000的糖蛋白,由432個氨基酸殘基組成,含糖量約10%。天然AT-Ⅲ以α、β兩種形式存在,其中90%為α形式(即完全糖基化)[1-3]。AT-Ⅲ是由肝細胞和血管內皮細胞分泌的絲氨酸蛋白酶抑制劑(serine protease inhibit

【參考文獻】

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1 趙維蒞;抗凝血酶制劑的臨床應用[J];國外醫(yī)學.輸血及血液學分冊;1999年02期

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【共引文獻】

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9 楊忠義;曹永生;蘇艷;劉曉利;李華惠;盧義宣;;中國栽培稻的秈稻和粳稻分類及方法(綜述)[A];云南省作物學會2004—2006年優(yōu)秀論文選集[C];2006年

10 烏斯?jié)M·依米提;古麗斯瑪依;張永輝;樊振;;高效乳酸菌對青貯飼料發(fā)酵品質的改善效果[A];第三屆全國微生物資源學術暨國家微生物資源平臺運行服務研討會會議論文摘要集[C];2011年

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9 朱美真;山東某地方品系雞雞胚中禽白血病病毒的分離及序列分析[D];山東農業(yè)大學;2010年

10 霍鳳梅;洋蔥種質資源遺傳多樣性的SRAP分析與查爾酮合成酶基因的分子克隆與表達研究[D];山東農業(yè)大學;2010年

【二級參考文獻】

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1 許國雙;陳香美;孫雪峰;吳鏑;嚴泉劍;師鎖柱;洪權;呂揚;;小鼠抗人Nanog多克隆抗體的制備及其鑒定[J];解放軍醫(yī)學雜志;2006年05期

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4 趙興旺;劉冉冉;鄭麥青;文杰;陳繼蘭;趙桂蘋;;雞髓樣分化因子88的原核表達及單克隆抗體制備[J];生物技術通訊;2011年06期

5 趙一t，

本文編號：1378593