本文關(guān)鍵詞：斑馬魚TIM家族基因鑒定及其在適應(yīng)性體液免疫應(yīng)答中的功能研究　出處：《浙江大學》2015年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：T細胞免疫球蛋白粘蛋白(Tcell Ⅰg and mucin, TIM )是一類Ⅰ型跨膜糖蛋白,近年來因其在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用而受到高度關(guān)注。本論文首次在斑馬魚中開展魚類TIM家族分子鑒定與功能研究,重點探討了斑馬魚TIM (DrTIM)家族兩個主要分子DrTIM-1L和DrTIM-4L的免疫學特性。采用分子克隆技術(shù)在斑馬魚中成功獲得了與哺乳動物TIM-1和TIM-4同源的TIM-1和TIM-4樣家族分子(DrTIM-1L和DrTIM-4L),生物信息學分析結(jié)果顯示,DrTIM- 1L和DrTIM-4L分子均屬于I型跨膜結(jié)構(gòu)蛋白,其中包括免疫球樣蛋白IgV、粘連區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)等結(jié)構(gòu)。亞細胞定位分析顯示,DrTIM-4L主要表達于細胞膜上,而DrTIM-1L則主要分布于細胞胞質(zhì)區(qū)域,受到相應(yīng)的刺激后可轉(zhuǎn)移至細胞膜上。通過對斑馬魚白細胞的免疫熒光標記顯示,DrTIM-4L可與MHC Ⅱ陽性細胞共標記,提示其主要分布于抗原遞呈細胞(APC),而DrTIM-1則與CD4陽性細胞共標記,提示其主要分布于CD4+T細胞,經(jīng)抗原刺激后,DrTIM-4L+MHCⅡ+和DrTIM-1L+CD4+T雙陽性細胞比例分別得到明顯上調(diào),提示DrTIM-1L和DrTIM-4L可能在APC啟動的適應(yīng)性免疫應(yīng)答中發(fā)揮作用。基因表達分析結(jié)果顯示,經(jīng)抗原刺激后,APC和T細胞表面的DrTIM-1L和DrTIM-4L表達上調(diào),外周血等免疫組織中DrTIM-4L+MHCⅡ+和DrTIM-1L+CD4+T雙陽性細胞比例顯著增加。通過針對DrTIM-4L和DrTIM-1L基因的siRNA體內(nèi)干擾實驗,結(jié)合抗體封閉技術(shù),發(fā)現(xiàn)在DrTIM-4L和DrTIM-1L表達受到干擾的情況下,T細胞增殖活化受到明顯抑制,表明DrTIM-4L和DrTIM-1L參與了適應(yīng)性免疫中T細胞的增殖活化；利用免疫磁珠分選技術(shù)分離APC和CD4+T細胞,并進行體外抗原遞呈功能研究,進一步證實DrTIM-4L和DrTIM-1L對APC介導(dǎo)的T細胞增殖有調(diào)節(jié)作用,最終可影響IgM的產(chǎn)生以及實驗魚對致病菌(A.hydrophila )的免疫保護力。此外,我們還克隆到一種新的可溶性形式的TIM-4L分子(sDrTIM-4L),發(fā)現(xiàn)它在適應(yīng)性免疫過程中具有抑制T細胞增殖活化的功能。研究結(jié)果為深入揭示TIM家族在調(diào)節(jié)適應(yīng)性體液免疫中作用及其功能演化機制,提供了斑馬魚實驗研究模型和科學依據(jù)。
[Abstract]:T cell 鈪，

本文編號：1377920