本文關(guān)鍵詞：NADPH氧化酶在5-HT加重的小鼠結(jié)腸炎模型中的表達及作用　出處：《河南科技大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：背景:炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一種慢性非特異性腸道炎癥性疾病,包括潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis,UC)和克羅恩病(Crohn’s Disease,CD)。IBD在北美、西歐等地區(qū)發(fā)病率較高,屬于常見病;但近年來該病在中國、新加坡等亞洲國家和地區(qū)的發(fā)病率不斷增高。到目前為止,IBD的確切病因尚未明確,遺傳因素、腸道菌群、細胞因子、活性氧類(reactive oxygen species,ROS)和NADPH氧化酶等均與IBD的發(fā)生相關(guān)。NADPH氧化酶家族由NOX1-NOX5、DUOX1和DUOX2組成,NADPH氧化酶產(chǎn)生的ROS在腸道中起著重要的生理作用。腸道中5-羥色胺(5-hydroxytryptamineh or serotonin,5-HT)主要由腸嗜鉻細胞(enterochromaffin cells,ECs)合成,在調(diào)控腸道運動、分泌等功能中發(fā)揮著重要作用。大量研究表明NADPH氧化酶和5-HT在正常腸道以及IBD的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。目的:探討在葡聚糖硫酸鈉(dextran sulfate sodium,DSS)誘導的小鼠實驗性結(jié)腸炎中5-HT對NADPH氧化酶表達的影響及作用。方法:選取6-8周齡的健康清潔級C57BL/6J(B6)雄性小鼠,隨機分成4組(n=8只):對照組,5-HT組,DSS組,DSS聯(lián)合5-HT組(5-HT+DSS組)。對照組每日自由飲用無菌蒸餾水,5-HT組采用直腸灌藥方式進行給藥,劑量為1.0 mg/kg,每3天一次,其它各組小鼠灌注生理鹽水作為對照;DSS組自由飲用1.0%的DSS溶液;5-HT+DSS組同時給予1.0 mg/kg 5-HT和1.0%DSS。在第6天造模結(jié)束后頸椎脫臼處死各組小鼠取結(jié)腸組織,通過結(jié)腸長度、血便情況、疾病活動指數(shù)(disease activity index,DAI)評分和蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色,以及髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)染色計數(shù)白細胞等方法評估腸道炎癥程度;采用實時定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)技術(shù)檢測小鼠結(jié)腸組織中白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-8和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α等促炎因子以及Nox1、Nox2、Nox4和Duox2等NADPH氧化酶mRNA的表達水平,分別應用免疫組織化學(immunohistochemistry,IHC)和Western blot檢測結(jié)腸組織中Nox1、Nox2、Nox4和Duox2蛋白的表達情況。結(jié)果:(1)5-HT組與對照組小鼠體重呈現(xiàn)不同程度的增加,小鼠活動如常、糞便性狀正常;DSS組小鼠有輕微的體重下降和腹瀉癥狀,表現(xiàn)為輕度炎癥,DAI評分和組織病理學評分增加;5-HT+DSS組體重下降較大、腹瀉明顯并出現(xiàn)血便等嚴重的急性腸炎表現(xiàn),DAI和組織病理學評分進一步升高。(2)IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α等炎癥因子在DSS組小鼠結(jié)腸中表達升高,在5-HT+DSS組進一步升高(P0.05);5-HT組雖然沒有明顯的腸炎表現(xiàn),但MPO染色顯示該組小鼠結(jié)腸粘膜中有一定量的白細胞聚集浸潤,聯(lián)合DSS能進一步增加白細胞的浸潤。(3)5-HT組小鼠結(jié)腸組織NADPH氧化酶Nox1、2、4和Duox2 mRNA的表達量分別是對照組的3.4、6.5、3.8和2.5倍(均P0.05);在輕度炎癥DSS組別中Nox2和Nox4分別升高了7.0和2.1倍(均P0.05,與對照組比較),Duox2上升了1.8倍,Nox1下降了3.3倍(P0.05);而在重度炎癥5-HT+DSS組中,Nox2和Nox4表達量進一步增高,分別是對照組的11.9和3.4倍(均P0.05),Duox2下降了1.7倍,而Nox1幾乎無表達(P0.001)。IHC結(jié)果顯示Nox2和Nox4主要定位于結(jié)腸組織浸潤的白細胞中,在5-HT組表達增高,隨著炎癥加重進一步增高;Nox1主要表達于結(jié)腸上皮細胞刷狀緣和杯狀細胞,Nox1在5-HT組表達升高,隨著炎癥的加重其表達下調(diào);Duox2主要表達于結(jié)腸上皮,在5-HT組和DSS組表達升高,在5-HT+DSS組表達下降。Western blot結(jié)果與IHC半定量結(jié)果一致。結(jié)論:(1)單獨應用5-HT作用于小鼠結(jié)腸并無腸炎表現(xiàn),但5-HT可能通過招募白細胞等在結(jié)腸粘膜聚集浸潤來加重DSS誘導的實驗性結(jié)腸炎。(2)5-HT能上調(diào)小鼠結(jié)腸組織NADPH氧化酶Nox1、Nox2、Nox4和Duox2 mRNA和蛋白的表達,提示5-HT可能通過上調(diào)結(jié)腸組織NADPH氧化酶的表達來參與結(jié)腸炎的發(fā)生、發(fā)展,而NADPH氧化酶在炎癥中的表達變化提示其在IBD中起著不同的作用。
[Abstract]:Background : Inflammatory bowel disease ( IBD ) is a chronic non - specific inflammatory bowel disease , including ulcerative colitis ( UC ) and Crohn ' s Disease ( CD ) . The effect of 5 - HT on the expression of NADPH oxidase ( NADPH oxidase ) was studied in 5 - HT group ( n = 8 ) : control group , 5 - HT group , 5 - HT group , DSS group , DSS group and 5 - HT group ( 5 - HT + DSS group ) . The expression of Nox1 , Nox2 , Nox4 and Duox2 protein in colon tissues was assessed by quantitative real - time PCR ( QRT - PCR ) . Results : ( 1 ) The expression of Nox1 , Nox2 , Nox4 and Duox2 protein in colon tissues was detected by real - time quantitative PCR ( QRT - PCR ) . Results : ( 1 ) The expression of NADPH oxidase Nox1 , Nox2 , Nox4 and Duox2 mRNA and protein in colon epithelial cells increased significantly in 5 - HT group . The results showed that 5 - HT could increase the expression of NADPH oxidase Nox1 , Nox2 , Nox4 and Duox2 mRNA and protein in colon epithelial cells .

【學位授予單位】：河南科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R574.62;R-332

【參考文獻】

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本文編號：1377035