本文關(guān)鍵詞：抗人降鈣素原特異性單克隆抗體的制備鑒定及初步應(yīng)用　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報》2013年06期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 降鈣素原 原核表達(dá) 單克隆抗體 特性鑒定 ELSIA檢測

【摘要】：目的獲得抗人降鈣素原(procalcitonin,PCT)單克隆抗體,并鑒定其基本特性。方法從NCBI數(shù)據(jù)庫中獲得PCT編碼序列,以原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)PCT重組蛋白,經(jīng)鎳親和層析柱純化,獲得篩選單克隆抗體的篩選原;綜合應(yīng)用多種生物信息學(xué)分析軟件預(yù)測PCT中潛在的B細(xì)胞表位肽,用合成肽對BALB/c小鼠進(jìn)行免疫,純化單克隆抗體,通過間接ELISA、Western blot和免疫組化鑒定獲得的單克隆抗體。將獲得的單克隆抗體作為捕獲抗體,經(jīng)過配對建立檢測重組PCT的ELISA體系,并初步對臨床血清進(jìn)行了檢測。結(jié)果成功獲得3株P(guān)CT特異性單克隆抗體,分別為2-D7、2-H12和4-H12,亞類分別為IgG1和IgG2a,最高效價為1∶1 024 000,親和力最高可達(dá)到1.3×109L/mol;選取2-D7經(jīng)Western blot鑒定能夠檢測重組PCT蛋白,經(jīng)免疫組化證實能特異性識別甲狀腺組織中PCT蛋白,經(jīng)過配對成功建立了檢測重組PCT的ELISA體系,運(yùn)用建立體系檢測臨床血清PCT含量時發(fā)現(xiàn)正常組與細(xì)菌培養(yǎng)陽性組之間具有顯著差異。結(jié)論成功表達(dá)了人PCT重組蛋白,獲得了3株高特異性和高親和力的PCT單克隆抗體,成功建立了檢測重組PCT的ELISA體系,并初步用于臨床樣本檢測。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗系臨床生物化學(xué)教研室;
【分類號】：R392-33
【正文快照】： 降鈣素原(procalcitonin,PCT)是一種無激素活性的降鈣素前肽物質(zhì)[1],來自于定位第11號染色體上的單拷貝基因,該基因由2 800個堿基對組成,含6個外顯子和5個內(nèi)含子,相對分子質(zhì)量約為13×103。在正常代謝下,甲狀腺C細(xì)胞產(chǎn)生PCT并分泌激素活性的降鈣素。正常人血中PCT濃度極低,但

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 郭建秀;李鵬;伍艷芳;易維京;劉進(jìn)軍;郭鷹;唐捷;胡川閩;;抗人MIF單克隆抗體的制備及其活性的初步鑒定[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2006年06期

2 易維京;李鵬;李淑慧;智強(qiáng);胡川閩;;人NT-proBNP的高效原核表達(dá)及免疫學(xué)檢測標(biāo)準(zhǔn)品的研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2008年06期

3 郭杰標(biāo);郭銳;劉艷華;;以抗體競爭結(jié)合抗原測定單抗親和力常數(shù)的研究[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2006年07期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 李新軍;張竹君;易維京;陳安;李淑慧;趙忠顥;劉明棟;范毓東;胡川閩;;抗preS1分子高效單克隆抗體的制備及其在血清LHBs檢測中的應(yīng)用[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2011年06期

2 張陽;陳莎;胡川閩;李淑慧;萬瑛;;抗hMIF單克隆抗體的活性鑒定及其對膿毒癥小鼠的保護(hù)作用[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2012年03期

3 陳銳;劉友生;朱江;段光杰;易維京;胡川閩;;人源N-末端脂多糖結(jié)合蛋白(NH-LBP)的原核表達(dá)及抗原性分析[J];免疫學(xué)雜志;2009年03期

4 畢華;丁有學(xué);王蘭;劉蘭;韓春梅;李永紅;饒春明;;ELISA法間接檢測血管內(nèi)皮生長因子抑制劑的相對結(jié)合力[J];中國生物制品學(xué)雜志;2010年06期

5 王偉偉;王遠(yuǎn)征;張國強(qiáng);馬昱;;狂犬病病毒抗體競爭ELISA檢測方法的建立及初步應(yīng)用[J];中國生物制品學(xué)雜志;2011年11期

6 叢珊;張陽;張竹君;易維京;陳安;胡川閩;余曉東;李淑慧;;心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)原核表達(dá)、純化及多克隆抗體制備研究[J];中國醫(yī)藥指南;2012年04期

7 戴啟宇;鄧?yán)?王會英;劉宇;楊廷桐;陸建福;錢磊;;抗人凋亡誘導(dǎo)因子單克隆抗體的制備與鑒定[J];中國組織工程研究;2012年42期

8 蘭向莉;李曉;馬延森;靳亞平;;Luman-N端融合蛋白單克隆抗體的制備[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2013年02期

9 張鴦;陶明亮;路保通;靳亞平;;抗Zhangfei蛋白單克隆抗體的制備[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2013年03期

相關(guān)會議論文 前1條

1 王偉偉;張國強(qiáng);;狂犬病病毒抗體檢測中競爭ELISA檢測方法廣譜包被抗原的選擇[A];2011中國生物制品年會暨第十一次全國生物制品學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 易維京;心衰標(biāo)志物NT-proBNP高效免疫傳感器檢測的關(guān)鍵技術(shù)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前7條

1 李新軍;抗preS1高特異性單克隆抗體的制備及其在血清LHBs檢測中的應(yīng)用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 劉保才;肝癌候選標(biāo)志物HCCR單克隆抗體制備及初步應(yīng)用[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

3 張鴦;抗Zhangfei蛋白單克隆抗體的制備及鑒定[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

4 陳雯;百日咳絲狀血凝素（FHA）的純化、抗-FHA單克隆抗體的研制及初步應(yīng)用[D];武漢生物制品研究所;2010年

5 王偉偉;狂犬病病毒抗體酶聯(lián)診斷試劑的研制[D];北京生物制品研究所;2010年

6 張鵬;重金屬鉛單克隆抗體的制備及ELISA檢測方法的建立[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

7 叢珊;心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP）的原核表達(dá)、純化及其單克隆、多克隆抗體的制備與應(yīng)用研究[D];重慶師范大學(xué);2012年

【二級參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 袁盛凌,段海清,張兆山;蛇毒類凝血酶Calobin cDNA的設(shè)計合成與克隆[J];生物技術(shù)通訊;2003年05期

2 傅思武,周殿元,賴卓勝,薛凈;抗艱難梭菌A毒素單克隆抗體的制備及特性分析[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2004年03期

3 王正國;膿毒癥研究概況[J];中華創(chuàng)傷雜志;2003年01期

4 王剛垛,魚濤,馬兆揚(yáng),李秋生,何鳳生;甲基對硫磷單克隆抗體的研制及鑒定[J];中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志;2001年04期

5 王剛,王琰,化冰,喬媛媛,劉玉峰;鏈替換技術(shù)提高抗角蛋白人Fab抗體的親和力[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2001年02期

6 朱勇,金伯泉,劉雪松;用生物傳感器測定重組人α2a-干擾素單克隆抗體的親和力及抗原識別表位[J];中國免疫學(xué)雜志;2000年06期

7 李革,熊杰,劉志峰;巨細(xì)胞病毒特異性IgG抗體親和力測定及其臨床意義[J];中國實用兒科雜志;2001年03期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王海燕;姜平;杜以軍;李玉峰;李軍星;沈芳;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NSP2的原核表達(dá)及其單克隆抗體的制備[J];中國生物工程雜志;2008年02期

2 侯強(qiáng);彭伍平;孫元;仇華吉;;豬瘟病毒E2蛋白主要抗原區(qū)編碼基因的原核表達(dá)及其單克隆抗體的制備[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2008年01期

3 羅正;劉若塵;鄭世軍;;單核增生性李氏桿菌溶血素的原核表達(dá)及其單克隆抗體的制備[J];生物工程學(xué)報;2009年11期

4 郭鷺;荊志強(qiáng);李俚;鞠環(huán)宇;馬波;王君偉;;抗鵝細(xì)小病毒VP3蛋白單克隆抗體的制備及鑒定[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2010年02期

5 肖成蕊;宋戰(zhàn)昀;楊立英;王偉利;孟慶峰;孟日增;;H3N8亞型馬流感病毒單克隆抗體的制備及鑒定[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年06期

6 王建和;頓新鵬;曲麗娜;楊唐斌;陳正望;;抗豌豆白蛋白1b單克隆抗體的制備與特性鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2006年02期

7 劉芳芳;金梅林;張安定;但漢并;陳煥春;;禽流感病毒核蛋白單克隆抗體的制備及部分特性鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2006年05期

8 葛葉;鄧國華;李雪平;陳化蘭;;流感病毒聚合酶PB1-1蛋白的表達(dá)與單克隆抗體的制備[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;2009年09期

9 王捷;劉增田;楊太成;楊靜;冼江;劉大志;;抗重組人骨唾液酸蛋白單克隆抗體的制備及鑒定[J];中國生化藥物雜志;2006年06期

10 劉霄卉;斯日古楞;羅軍榮;周建華;馬學(xué)恩;;綿羊肺腺瘤病毒囊膜基因表面蛋白的表達(dá)及其單克隆抗體的制備[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;2008年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 袁媛;周新;;HBG1和TFRC基因的克隆與原核表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會檢驗分會成立30周年慶典大會資料匯編[C];2009年

2 楊濤;朱筱娟;;抗酸性成纖維細(xì)胞生長因子單鏈抗體的構(gòu)建及其活性研究[A];吉林省第六屆生命科學(xué)大型學(xué)術(shù)報告會論文集[C];2008年

3 袁媛;周新;;HBG1和TFRC基因的克隆與原核表達(dá)[A];第八次全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會議(中華醫(yī)學(xué)會2009年醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)年會)論文摘要匯編[C];2009年

4 楊衛(wèi)沖;焦新安;潘志明;張?zhí)K華;孫泉云;黃金林;;重組牛γ干擾素單克隆抗體的制備與初步鑒定[A];第六屆全國會員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集（下）[C];2005年

5 王香菊;徐秀蘭;嚴(yán)紅;蒯應(yīng)松;陳艷;;抗人血紅蛋白(Hb)單克隆抗體制備及其特性鑒定[A];第二次全國法醫(yī)物證學(xué)學(xué)術(shù)交流會論文集[C];1998年

6 韓凌霞;陳雷;丁家波;劉岳龍;秦愛建;;MDV囊膜糖蛋白Ⅰ原核表達(dá)產(chǎn)物單克隆抗體的制備[A];第四屆中國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2001年

7 黃紅亮;陳煥春;陳美玲;貝為成;嚴(yán)琳;;胸膜肺炎放線桿菌毒素Ⅳ基因3'-端的克隆、原核表達(dá)及單克隆抗體的制備[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2004學(xué)術(shù)年會暨第五屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2004年

8 王香菊;徐秀蘭;嚴(yán)紅;蒯應(yīng)松;陳艷;;抗人免疫球蛋白IgG單克隆抗體制備及其特性鑒定[A];第二次全國法醫(yī)物證學(xué)學(xué)術(shù)交流會論文集[C];1998年

9 楊肅文;張鈞;周美霞;樂志安;謝鑫友;;尼克酰胺-N-甲基轉(zhuǎn)移酶單克隆抗體的制備及鑒定[A];2008年浙江省檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

10 倪宏波;姜海芳;周玉龍;王春仁;辛九慶;劉思國;宮大慶;錢愛東;;抗牛邊緣無漿體MSP5單克隆抗體的制備及鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 賈超時邋李德成;單克隆抗體產(chǎn)業(yè)研發(fā)項目將落戶大慶[N];大慶日報;2008年

2 小許;市領(lǐng)導(dǎo)會見美國生物醫(yī)藥巨頭[N];無錫日報;2010年

3 姜海;英科學(xué)家發(fā)現(xiàn)單克隆抗體[N];科技日報;2007年

4 本報特約撰稿人 李朝;單抗：生物醫(yī)藥發(fā)展的主旋律[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2006年

5 記者 項錚;賽諾菲巴斯德研制抗狂犬病單克隆抗體[N];科技日報;2008年

6 記者 楊俊堅;單抗藥物：站在同一起跑線[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2011年

7 張蕾;治療用單克隆抗體[N];光明日報;2002年

8 張驍束;梅英;單克隆抗體的研究進(jìn)展[N];中國醫(yī)藥報;2003年

9 李曉;“蘇州系列”單克隆抗體走向世界[N];蘇州日報;2008年

10 鄒平;單克隆抗體研究取得突破[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 莊國洪;抗DR4、DR5單克隆抗體誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株凋亡的研究[D];吉林大學(xué);2004年

2 韓凌霞;豬圓環(huán)病毒2型基因的原核表達(dá)與單克隆抗體的制備及感染性分子克隆的動物接種試驗[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2003年

3 唐琳;肝再生增強(qiáng)因子與肝癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

4 付建芳;溶藻弧菌抗獨(dú)特型抗體基因工程疫苗的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

5 侯桂華;巨噬細(xì)胞移動抑制因子在同種移植排斥中作用及其機(jī)理的研究[D];山東大學(xué);2004年

6 趙宇軍;豬戊型肝炎病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因表達(dá)及其基因特異性噬菌體展示肽庫構(gòu)建[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2005年

7 王曉潔;對蝦白斑癥病毒快速檢測試劑盒的研制及其應(yīng)用[D];中國海洋大學(xué);2005年

8 李寶全;H9亞型禽流感病毒抗獨(dú)特型抗體的研制與其免疫原性的初步分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

9 徐海燕;人BAFF基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞及其單克隆抗體的生物學(xué)特性[D];蘇州大學(xué);2005年

10 郭莉;一個新的白細(xì)胞膜抗原ZCH-2B8a編碼基因及其生物學(xué)特性的研究[D];浙江大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊衛(wèi)沖;牛γ干擾素基因cDNA的克隆、表達(dá)及其表達(dá)產(chǎn)物單克隆抗體的研制[D];揚(yáng)州大學(xué);2005年

2 李軍;人Toll樣受體-9的表達(dá)及其抗體制備[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

3 侯強(qiáng);豬瘟病毒E2蛋白主要抗原區(qū)的表達(dá)及其單克隆抗體的制備[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

4 劉進(jìn)軍;人巨噬細(xì)胞移動抑制因子的原核表達(dá)及其單克隆抗體的制備[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

5 寧北芳;乙腦病毒和西尼羅病毒單克隆抗體的制備及鑒定[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

6 王曉杜;豬干擾素α、β、γ基因克隆、原核表達(dá)及其單克隆抗體制備的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

7 姜麗英;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白基因的原核表達(dá)及其單克隆抗體的研制[D];揚(yáng)州大學(xué);2008年

8 王政;抗GST標(biāo)簽蛋白單克隆抗體的制備及其活性鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

9 楊利敏;應(yīng)用核糖體展示技術(shù)對A型肉毒梭菌毒素保護(hù)性抗原表位的初步研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2005年

10 沈芳;豬腦心肌炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3AB和3ABC基因的表達(dá)與3AB單克隆抗體的制備[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

，

本文編號：1326828