本文關(guān)鍵詞：雪旺細(xì)胞純化培養(yǎng)及體外復(fù)合豬小腸黏膜下層的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《中國(guó)修復(fù)重建外科雜志》2013年06期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 組織工程 雪旺細(xì)胞 小腸黏膜下層 NGF 生物相容性 神經(jīng)修復(fù)

【摘要】：目的改進(jìn)雪旺細(xì)胞(Schwann cells,SCs)原代培養(yǎng)方法,以獲得大量高純度SCs;研究豬小腸黏膜下層(small intestinal submucosa,SIS)與SCs的生物相容性;通過復(fù)合SCs,使SIS負(fù)載NGF。方法取2～3日齡SD乳鼠雙側(cè)坐骨神經(jīng),以胰蛋白酶、Ⅱ型膠原酶分步消化,差速貼壁20 min,G418處理48 h,含2.5%FBS的H-DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng);MTT法檢測(cè)SCs增殖情況,抗S-100免疫熒光染色檢測(cè)SCs純度。將第3代SCs和SIS復(fù)合培養(yǎng),行HE染色和掃描電鏡觀察兩者復(fù)合生長(zhǎng)情況,復(fù)合培養(yǎng)1、2、3、4、5、7 d ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清中NGF含量。復(fù)合培養(yǎng)3、5、7、10、13、15 d后反復(fù)凍融脫細(xì)胞處理,ELISA法檢測(cè)脫細(xì)胞后SIS中NGF含量。結(jié)果純化后的SCs純度達(dá)98%以上;MTT檢測(cè)示SCs傳代后3 d進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,7 d后進(jìn)入平臺(tái)期。HE染色和掃描電鏡觀察均顯示SCs在SIS上黏附良好,細(xì)胞形態(tài)呈紡錘形,有明顯突起,分泌較多細(xì)胞外基質(zhì)。ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SCs與SIS復(fù)合培養(yǎng)后,培養(yǎng)上清中的NGF含量隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸升高,與同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。通過與SCs復(fù)合后反復(fù)凍融脫細(xì)胞,SIS中NGF含量在培養(yǎng)10 d達(dá)峰值(414.29±20.87)pg/cm2,顯著高于未復(fù)合細(xì)胞的單純SIS材料中NGF含量(4.92±2.06)pg/cm2,比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論聯(lián)合雙酶消化、差速貼壁、G418處理、低濃度酶消化和低濃度血清培養(yǎng),可在較短時(shí)間內(nèi)獲得大量高純度SCs。SCs與SIS復(fù)合生長(zhǎng)相容性好,不影響SCs的NGF分泌。通過與SCs的復(fù)合、反復(fù)凍融脫細(xì)胞后,SIS中負(fù)載了大量NGF,有望成為良好的神經(jīng)修復(fù)材料。
【作者單位】： 四川大學(xué)華西醫(yī)院再生醫(yī)學(xué)研究中心·干細(xì)胞與組織工程研究室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31271058、81100327) 國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863)資助項(xiàng)目(2012AA020503)~~
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 臨床上常采用自體神經(jīng)移植修復(fù)長(zhǎng)段周圍神經(jīng)缺損,但存在明顯缺陷,如可供移植的神經(jīng)數(shù)量和長(zhǎng)度有限、造成供區(qū)功能障礙、移植神經(jīng)直徑與受體難以匹配和可能造成錯(cuò)向再生等。雪旺細(xì)胞(Schwann cells,SCs)是周圍神經(jīng)系統(tǒng)的主要膠質(zhì)細(xì)胞,周圍神經(jīng)受損后SCs被迅速激活,形成Büngne

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