發(fā)布時間：2017-12-04 15:10

  本文關(guān)鍵詞：Nestin轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立及nestin基因在器官中的表達(dá)

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【摘要】：目的構(gòu)建人nestin基因表達(dá)載體,制備nestin過表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠。方法以人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251的cDNA為模板,分3段擴(kuò)增出nestin基因cDNA全序列,并將其克隆入含有強(qiáng)啟動子ROSA26的pBROAD3載體,酶切鑒定、測序,除去原核序列,純化。顯微原核注射建立轉(zhuǎn)基因小鼠。PCR驗證nestin基因整合,確定建立首建者。將陽性鼠傳代。Western blot方法檢測F3代轉(zhuǎn)基因小鼠與野生型小鼠主要器官(心、肺、腦、腎)的nestin表達(dá)。結(jié)果測序結(jié)果證明成功構(gòu)建了受ROSA26啟動子調(diào)控的nestin轉(zhuǎn)基因載體。出生34只小鼠,PCR檢測證實(shí)存在首建者2只。Western blot方法證實(shí),與野生型小鼠相比,F3代轉(zhuǎn)基因小鼠腦、肺組織存在較高水平nestin表達(dá)。結(jié)論首次成功建立nestin過表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠,外源基因可遺傳到子代并在腦和肺組織中穩(wěn)定表達(dá),為深入研究nestin在腫瘤轉(zhuǎn)移、細(xì)胞"干性"的維持和細(xì)胞的分化等功能提供了良好的實(shí)驗動物模型。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所;南方醫(yī)科大學(xué)組織胚胎教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金委與廣東省政府聯(lián)合重點(diǎn)基金(U0732006)~~
【分類號】：R-332
【正文快照】： Nestin屬于Ⅵ型中間纖維絲蛋白,Mr220 000~250 000。它在胚胎發(fā)育早期過程中,在神經(jīng)外胚層組織強(qiáng)烈表達(dá)。隨著組織發(fā)育分化,nestin表達(dá)逐漸減少,因此它被作為神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)記物[1]。在胚胎發(fā)育早期,多種組織也強(qiáng)烈表達(dá)nestin[2-5]。在成體組織中,nestin只在部分具有分化潛能

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本文編號：1251410