本文關(guān)鍵詞：角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子促進(jìn)人胚神經(jīng)干細(xì)胞增殖與分化的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的探討人源性角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子2(human keratinocyte growth factor 2,hKGF-2)對(duì)體外長(zhǎng)期培養(yǎng)人胚神經(jīng)干細(xì)胞(human neural stem cells,hNSCs)存活和分化的影響。方法將液氮凍存17代hNSCs復(fù)蘇常規(guī)培養(yǎng)7 d形成神經(jīng)球后,取少許行免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定干細(xì)胞及分化細(xì)胞特異抗原。一部分神經(jīng)球濃縮后種植至12孔培養(yǎng)板中,分為7組,每組6孔,均添加1 mL基礎(chǔ)培養(yǎng)液[含N2(1∶100)、20 ng/mL EGF的DMEM/F12培養(yǎng)基]后,B、C、D、E、F組分別添加10、30、60、90、120 ng/mL KGF-2,G組添加10 ng/mL bFGF,A組為空白對(duì)照組;培養(yǎng)7、14 d觀察并計(jì)數(shù)神經(jīng)球與hNSCs,了解神經(jīng)球生長(zhǎng)與增殖情況。另一部分濃縮后種植至置有多聚賴(lài)氨酸包被玻片的6孔培養(yǎng)板內(nèi),分為4組,每組6孔,均添加3 mL DMEM/F12培養(yǎng)基后,A1、B1、C1、D1組對(duì)應(yīng)加入N2(1∶100)、N2(1∶100)+90 ng/mL hKGF-2、FBS(1∶20)、FBS(1∶20)+90 ng/mL hKGF-2;培養(yǎng)14 d內(nèi)觀察神經(jīng)球生長(zhǎng)與分化情況。7 d時(shí)各取5孔玻片行免疫熒光細(xì)胞化學(xué)鑒定和流式細(xì)胞儀檢測(cè),分析神經(jīng)球的生長(zhǎng)與分化狀況。結(jié)果復(fù)蘇后培養(yǎng)形成的神經(jīng)球含大量巢蛋白陽(yáng)性細(xì)胞,充滿(mǎn)整個(gè)神經(jīng)球;誘導(dǎo)分化后表達(dá)分化細(xì)胞特異性蛋白神經(jīng)絲200(neurofilament200,NF-200)和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)。各組神經(jīng)球培養(yǎng)7 d后均有不同程度增大;隨hKGF-2濃度增加,神經(jīng)球數(shù)量和hNSCs數(shù)目均依次增多,呈遞增趨勢(shì),E、F、G組顯著高于A、B、C、D組(P0.05);B、C、D組間兩兩比較差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);但A、B組間以及E、F、G組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。體外誘導(dǎo)過(guò)程中,A1、B1、C1、D1組分化細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛程度呈遞增趨勢(shì),組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);B1組NF-200陽(yáng)性率顯著高于其余3組(P0.05),GFAP陽(yáng)性率顯著低于其余3組(P0.05);A1、C1、D1組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。培養(yǎng)14 d后各組生長(zhǎng)均達(dá)峰值,以星形細(xì)胞為主。結(jié)論體外培養(yǎng)17代的hNSCs系純化hNSCs,hKGF-2能促進(jìn)其增殖和誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元細(xì)胞。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨科;瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院骨與關(guān)節(jié)外科;
【基金】：重慶市衛(wèi)生局中醫(yī)藥科技項(xiàng)目(渝中醫(yī)2009-1-10) 四川省衛(wèi)生廳課題資助項(xiàng)目(07018)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R329
【正文快照】： 隨著干細(xì)胞組織工程研究的發(fā)展,神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)已越來(lái)越廣泛地應(yīng)用于基礎(chǔ)研究及臨床研究。但目前困擾研究者的問(wèn)題是,如何在需要NSCs尤其是人胚神經(jīng)干細(xì)胞(human NSCs,hNSCs)增殖時(shí)大量增殖并保留干細(xì)胞特性,在需要向神經(jīng)元方向分化時(shí)盡可能多地分化為神

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 陽(yáng)運(yùn)康;魯曉波;張忠杰;林月秋;湯遜;徐永清;;人胚神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)與基因修飾后體內(nèi)的表達(dá)[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2007年03期

2 富賽里,馬政文,尹嵐,陸佩華,徐曉明;胚胎大鼠腦和脊髓神經(jīng)干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)[J];生理學(xué)報(bào);2003年03期

3 馬雁冰,李擎,謝天宏,李鴻鈞,Q曖，

本文編號(hào)：1174711