本文關(guān)鍵詞：人p21活化激酶6基因截短區(qū)域的GST標(biāo)簽原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其重組蛋白的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： P活化激酶 截短區(qū)域 原核表達(dá)質(zhì)粒 GST融合蛋白

【摘要】：目的:構(gòu)建人p21活化激酶6(PAK6)的各個截短區(qū)域原核表達(dá)質(zhì)粒,并誘導(dǎo)和鑒定其融合蛋白的表達(dá),為探討PAK6基因的生物學(xué)功能提供依據(jù)。方法:以真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-GFP-PAK6為模板,PCR擴(kuò)增出PAK6基因的各個截短片段。所獲得的各截短片段經(jīng)EcoRⅠ/XhoⅠ雙酶切后克隆至GST標(biāo)簽的原核表達(dá)載體pGEX-5X-1中。將構(gòu)建的PAK6各截短質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入E.coli BL21中,采用IPTG誘導(dǎo)PAK6基因截短融合蛋白表達(dá),采用Western blotting法鑒定PAK6基因截短融合蛋白的表達(dá)。結(jié)果:EcoRⅠ/XhoⅠ雙酶切后得到與預(yù)期大小相符的載體片段(5 000bp)和PAK6 1-55(165bp)、PAK6 56-210(465bp)、PAK6 211-410(600bp)及PAK6 385-681(891bp)4個片段。Western blotting檢測,PAK6各截短區(qū)域質(zhì)粒GST-PAK6截短融合蛋白相對分子質(zhì)量分別為32 000、43 000、48 000和60 000。結(jié)論:成功構(gòu)建PAK6基因各個截短區(qū)域GST標(biāo)簽原核表達(dá)質(zhì)粒并表達(dá)其重組蛋白。
【作者單位】： 中國醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)教研室教育部醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)重點(diǎn)實驗室;中國醫(yī)科大學(xué);
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助課題(31171360)
【分類號】：R346
【正文快照】： 人p21活化激酶(p21-activated kinase,PAK)是保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,PAK為Rho家族小鳥苷三磷酸酶(Rho-GTPase)Cdc42/Rac1下游重要的靶蛋白,參與許多重要的細(xì)胞活動,如細(xì)胞骨架重建、細(xì)胞移動/遷移、細(xì)胞凋亡與生存和細(xì)胞周期與有絲分裂,而且與腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移密切關(guān)

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本文編號：1174864