本文關(guān)鍵詞：聯(lián)合UV及SDS-PAGE監(jiān)測(cè)并優(yōu)化碳二亞胺偶聯(lián)法制備多肽免疫原

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【摘要】：建立了一種多肽免疫抗原偶聯(lián)的雙監(jiān)測(cè)法,獲得一種操作簡(jiǎn)便、成功率高、適用范圍廣的碳二亞胺偶聯(lián)法,并應(yīng)用于多種腫瘤相關(guān)多肽標(biāo)志物的免疫抗原制備。以合成多肽SP0104為標(biāo)準(zhǔn)品,牛血清白蛋白(BSA)為載體蛋白,碳二亞胺(EDC)為偶聯(lián)劑,對(duì)加樣順序、投料比、偶聯(lián)時(shí)間等關(guān)鍵條件進(jìn)行考察,采用UV和SDS-PAGE對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行聯(lián)合監(jiān)測(cè),以偶聯(lián)比和偶聯(lián)率聯(lián)合評(píng)價(jià)反應(yīng)條件。加樣順序?yàn)槎嚯暮洼d體蛋白先混合再加到碳二亞胺中,三者質(zhì)量比為1∶1∶1,偶聯(lián)時(shí)間為12 h,偶聯(lián)比在4∶1～12∶1之間,偶聯(lián)率在9%～20%之間,所得SP0104多抗效價(jià)達(dá)到1∶80 000,MALDI-TOF質(zhì)譜分析證實(shí)該抗體準(zhǔn)確捕獲目標(biāo)抗原。用優(yōu)化的偶聯(lián)方法制備多肽SPC09、SPC15、SPG01、SPG03、SPG04的免疫抗原,所得免疫血清效價(jià)均在1∶1萬(wàn)以上,最高可達(dá)1∶51.2萬(wàn)。所建碳二亞胺多肽偶聯(lián)聯(lián)合監(jiān)測(cè)法簡(jiǎn)便實(shí)用,可提高多肽抗體制備的成功率。
【作者單位】： 中南大學(xué)藥學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所;北京蛋白質(zhì)組研究中心 蛋白質(zhì)組學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 國(guó)家蛋白質(zhì)科學(xué)中心(北京);中山大學(xué)腫瘤防治中心;北京正旦國(guó)際科技有限責(zé)任公司;湖南金健藥業(yè)有限責(zé)任公司;
【基金】：863項(xiàng)目(2012AA020205) 國(guó)家科技部重大儀器專項(xiàng)(2012YQ18011710)
【分類號(hào)】：R392;O657.77
【正文快照】： 具有生物活性的多肽標(biāo)志物,在腫瘤血清生化學(xué)早期診斷中具有獨(dú)特作用[1-2],而多肽抗體的制備,成為應(yīng)用相關(guān)生化診斷技術(shù)必須解決的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[3-6]。由于多肽存在抗原表位少、分子量小(一般低于10 kDa)、缺乏T細(xì)胞表位等特點(diǎn),導(dǎo)致免疫原性弱,難以直接誘導(dǎo)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生抗體[7],

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 吳媛媛,包永明,王煈,梁興超,修志龍;氯霉素全抗原的合成與鑒定[J];化學(xué)通報(bào);2005年06期

2 張存政,劉賢進(jìn),余向陽(yáng),王冬蘭,高亮;對(duì)硫磷半抗原改造及其免疫抗體[J];南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年04期

3 朱國(guó)念,桂文君,鄭尊濤,程敬麗,吳剛;吡蟲(chóng)啉人工抗原的合成與鑒定[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2005年03期

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本文編號(hào)：1136504