本文關鍵詞：聯合UV及SDS-PAGE監(jiān)測并優(yōu)化碳二亞胺偶聯法制備多肽免疫原

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【摘要】：建立了一種多肽免疫抗原偶聯的雙監(jiān)測法,獲得一種操作簡便、成功率高、適用范圍廣的碳二亞胺偶聯法,并應用于多種腫瘤相關多肽標志物的免疫抗原制備。以合成多肽SP0104為標準品,牛血清白蛋白(BSA)為載體蛋白,碳二亞胺(EDC)為偶聯劑,對加樣順序、投料比、偶聯時間等關鍵條件進行考察,采用UV和SDS-PAGE對反應產物進行聯合監(jiān)測,以偶聯比和偶聯率聯合評價反應條件。加樣順序為多肽和載體蛋白先混合再加到碳二亞胺中,三者質量比為1∶1∶1,偶聯時間為12 h,偶聯比在4∶1～12∶1之間,偶聯率在9%～20%之間,所得SP0104多抗效價達到1∶80 000,MALDI-TOF質譜分析證實該抗體準確捕獲目標抗原。用優(yōu)化的偶聯方法制備多肽SPC09、SPC15、SPG01、SPG03、SPG04的免疫抗原,所得免疫血清效價均在1∶1萬以上,最高可達1∶51.2萬。所建碳二亞胺多肽偶聯聯合監(jiān)測法簡便實用,可提高多肽抗體制備的成功率。
【作者單位】： 中南大學藥學院;軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所;北京蛋白質組研究中心 蛋白質組學國家重點實驗室 國家蛋白質科學中心(北京);中山大學腫瘤防治中心;北京正旦國際科技有限責任公司;湖南金健藥業(yè)有限責任公司;
【基金】：863項目(2012AA020205) 國家科技部重大儀器專項(2012YQ18011710)
【分類號】：R392;O657.77
【正文快照】： 具有生物活性的多肽標志物,在腫瘤血清生化學早期診斷中具有獨特作用[1-2],而多肽抗體的制備,成為應用相關生化診斷技術必須解決的關鍵環(huán)節(jié)[3-6]。由于多肽存在抗原表位少、分子量小(一般低于10 kDa)、缺乏T細胞表位等特點,導致免疫原性弱,難以直接誘導動物機體產生抗體[7],

【二級參考文獻】

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1 吳媛媛,包永明,王煈,梁興超,修志龍;氯霉素全抗原的合成與鑒定[J];化學通報;2005年06期

2 張存政,劉賢進,余向陽,王冬蘭,高亮;對硫磷半抗原改造及其免疫抗體[J];南京農業(yè)大學學報;2002年04期

3 朱國念,桂文君,鄭尊濤,程敬麗,吳剛;吡蟲啉人工抗原的合成與鑒定[J];中國農業(yè)科學;2005年03期

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本文編號：1136504