發(fā)布時(shí)間：2017-11-03 15:01

  本文關(guān)鍵詞：利用細(xì)胞篩選法從噬菌體抗體庫鑒定人源HIV-1單克隆中和抗體

  更多相關(guān)文章： HIV- 中和抗體 包膜蛋白 噬菌體抗體庫 細(xì)胞法篩選

【摘要】：以細(xì)胞法從HIV-1CRF07_BC特異性噬菌體抗體庫中篩選和鑒定針對(duì)病毒包膜蛋白(Envelope,Env)的人源單克隆中和抗體。將pCH064.2-Env質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,以表達(dá)Env的活細(xì)胞淘洗噬菌體抗體庫;利用細(xì)胞ELISA方法篩選Env特異性噬菌體陽性克隆,并測定抗體重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)序列;以Ni+2-NTA層析柱純化抗體Fab,SDS-PAGE分析抗體純度;采用基于轉(zhuǎn)染細(xì)胞和重組蛋白的ELISA以及流式細(xì)胞技術(shù)分析抗體的結(jié)合活性;以HIV-1假病毒系統(tǒng)評(píng)價(jià)抗體的中和活性。四輪淘洗使細(xì)胞特異性噬菌體得到約650倍的高度富集,細(xì)胞ELISA篩選到28個(gè)抗HIV Env的陽性克隆,序列分析發(fā)現(xiàn)五個(gè)具有不同VH和VL序列的抗體Fab(2801、2837、2863、2870和2920)。這些抗體與轉(zhuǎn)染env的293T細(xì)胞反應(yīng),但不與重組表達(dá)的可溶性gp120蛋白反應(yīng),說明它們有可能針對(duì)依賴于Env復(fù)合物的空間構(gòu)象表位。我們發(fā)現(xiàn)2801、2863和2870三個(gè)Fab抗體對(duì)HIV-1CRF07_BC亞型CH120.6毒株具有較強(qiáng)的中和活性,其IC50值分別為2.24μg/mL、0.89μg/mL和3.09μg/mL。其中,2801和2863對(duì)B亞型HIV-1毒株SF162具有較強(qiáng)的交叉中和作用,其IC50值分別為0.69μg/mL和3.52μg/mL。提示表達(dá)于293T細(xì)胞表面的HIV-1 Env可以有效富集和篩選噬菌體抗體庫,并能成功分離和鑒定依賴于Env空間構(gòu)象表位的HIV-1中和抗體。因此本研究為探討HIV-1中和抗體的反應(yīng)機(jī)制和研發(fā)艾滋病疫苗提供了新的技術(shù)平臺(tái)。
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院;中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所;
【基金】：國家十二五艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治專項(xiàng)(2012ZX10001-008) 國家杰出青年基金(81025009) 國家自然科學(xué)基金(81101249)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 自1981年確認(rèn)首例艾滋病以來,艾滋病已成為對(duì)人類健康和社會(huì)穩(wěn)定威脅最大的感染性疾病之一。全球已有超過6 000萬感染者,造成2 500多萬人死亡。因此研制一種安全有效的艾滋病疫苗對(duì)于預(yù)防和控制HIV-1的流行具有重要意義。一個(gè)良好的艾滋病疫苗不僅能誘導(dǎo)CD8+細(xì)胞免疫反應(yīng),也應(yīng)

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 何玉先,王學(xué),劉順愛,何忠平,周瑩,徐克沂,徐道振;人源抗人免疫缺陷病毒1型噬菌體抗體庫的構(gòu)建及篩選[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;1998年01期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 舒文祥;余為一;王靜;;雞血清IgG純化方法研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年25期

2 郝淑美;李群;王承宇;王化磊;楊松濤;夏咸柱;;H5N1亞型禽流感病毒血凝素蛋白單鏈抗體基因的克隆及表達(dá)[J];病毒學(xué)報(bào);2009年01期

3 王丁丁;許天敏;余麗江;蘇曼曼;黃樹林;宿曉云;陳磊;顏煒群;;應(yīng)用畢赤酵母分泌表達(dá)篩選人抗狂犬病毒抗體scFv-Fc[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年06期

4 陳銳;劉友生;朱江;段光杰;葛曉冬;;一種大容量天然人源核糖體展示單鏈抗體文庫的構(gòu)建[J];重慶醫(yī)學(xué);2009年09期

5 齊永華;董永軍;寧紅梅;趙坤;;單鏈抗體技術(shù)在農(nóng)獸藥殘留檢測方面的研究進(jìn)展[J];東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年09期

6 鄭志明;金社勝;肖希龍;候曉林;;抗諾氟沙星噬菌體單鏈抗體庫的構(gòu)建與篩選[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年S1期

7 周捷;臧林泉;馮文彬;潘雪刁;王軍業(yè);郭桐;王秀芳;田亮;劉海洋;;肺癌血清中特異性結(jié)合多肽的篩選[J];廣東醫(yī)學(xué);2010年08期

8 潘陽;王露楠;;單克隆抗體人源化技術(shù)研究進(jìn)展[J];國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2011年13期

9 安宇;王穎;張東杰;柳增善;;抗磺胺二甲嘧啶單鏈抗體基因的克隆與序列分析[J];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào);2008年06期

10 ;行業(yè)會(huì)訊[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2009年12期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 高麗;杜瑩;張忠湛;楊松濤;夏咸柱;高玉偉;;犬細(xì)小病毒熒光抗體的制備及其鑒定[A];第十三次全國養(yǎng)犬學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

2 齊永華;張素霞;吳聰明;沈建忠;;單鏈抗體技術(shù)在獸藥殘留檢測方面的研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì)第十次研討會(huì)論文摘要集[C];2009年

3 鄭志明;金社勝;肖希龍;候曉林;;抗諾氟沙星噬菌體單鏈抗體庫的構(gòu)建與篩選[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)食品衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 葉剛;采用抗體庫優(yōu)化法對(duì)抗肝癌單鏈抗體人源化改造的研究[D];暨南大學(xué);2007年

2 付永鋒;抗剛地弓形蟲特異性人源抗體Fab片段的制備和研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

3 陳銳;核糖體展示人源性scFv文庫的構(gòu)建及篩選抗人LBP抗體的局限性分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

4 張愛華;赭曲霉毒素A免疫檢測方法的研究與嘔吐毒素生物轉(zhuǎn)化菌NJA-1的鑒定[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

5 夏汝山;基因工程抗角蛋白抗體全長人IgG在CHO（dhfr～-）細(xì)胞的表達(dá)[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

6 許銘炎;四川彝族、新疆維族HLA-B基因多態(tài)性分析及其應(yīng)用研究[D];汕頭大學(xué);2004年

7 范國英;鏈霉素殘留免疫學(xué)快速檢測技術(shù)研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

8 王縛鯤;重組人抗幽門螺桿菌尿素酶B亞單位sIgA分子的構(gòu)建表達(dá)及特性研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

9 康振華;大鼠抗人RANTES單克隆抗體在減輕大鼠小腸移植排斥反應(yīng)中的應(yīng)用及其人源化[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

10 陶艷琳;抗惡性瘧原蟲特異性人源抗體Fab片段的制備和研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 閆曉敏;魚源Fab噬菌體抗體庫的篩選、鑒定及抗SAs抗體的可溶性表達(dá)[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 李兆學(xué);人紅細(xì)胞單鏈抗體的制備與血凝試驗(yàn)方法的初步建立[D];河南工業(yè)大學(xué);2010年

3 季澤俊;抗DR5多價(jià)抗體的抗腫瘤作用[D];河南大學(xué);2011年

4 周捷;以噬菌體展示肽庫篩選肺癌清特異性多肽及腫瘤標(biāo)志物[D];廣東藥學(xué)院;2010年

5 王輝;斑點(diǎn)叉尾洶天然單鏈?zhǔn)删w抗體庫的構(gòu)建及初步鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 趙禹;人TRAb噬菌體抗體庫的初建[D];天津醫(yī)科大學(xué);2003年

7 段麗君;人TRAb單鏈組合文庫的構(gòu)建[D];天津醫(yī)科大學(xué);2005年

8 黎玉梅;利用噬菌體展示技術(shù)制備高致病性禽流感病毒（HPAIV）的單鏈抗體（ScFv）[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

9 馬玲;抗CD22人源化基因工程多價(jià)微型抗體的初步表達(dá)[D];廣西大學(xué);2007年

10 曠瑜;聚乙二醇修飾重組人干擾素ω的藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];重慶大學(xué);2007年

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬紅霞;于湘暉;姜春來;吳永革;孔維;;中國流行株HIV-1B/C重組亞型包膜蛋白真核表達(dá)載體的構(gòu)建及穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選[J];中國生物制品學(xué)雜志;2006年04期

2 曹志亮;何玉先;;HIV-1中和抗體和基于抗體的疫苗設(shè)計(jì)[J];中國生物工程雜志;2010年12期

3 王學(xué),周瑩;人免疫缺損病毒1型的中和抗體[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1997年S2期

4 馬文彬,馮百芳,陶其敏;小鼠抗E2抗體在體外可以捕獲丙型肝炎病毒(英文)[J];Chinese Medical Journal;2001年08期

5 嚴(yán)家新;用加入QS-21的亞單位疫苗誘導(dǎo)HIV-1gp120特異的交叉反應(yīng)性CTL應(yīng)答[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;1998年03期

6 曹鳳,季陽;HIV-1 感染的長期非進(jìn)展者的特征[J];中國性病艾滋病防治;1997年03期

7 王劍虹;通過接種劑量及接種程序調(diào)節(jié)對(duì)重組HIV-1_(MN)gp160疫苗的免疫應(yīng)答[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;1999年01期

8 胡新韜;洪坤學(xué);邵一鳴;;抗HIV廣譜中和血清表位特異性研究進(jìn)展[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2011年05期

9 鄭紅,朱錫華;HIV疫苗的研究策略及其進(jìn)展[J];免疫學(xué)雜志;2000年S1期

10 康曉平,楊保安,趙慧,祝慶余;從噬菌體庫中篩選抗SARS病毒S蛋白的Fab中和活性抗體研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2005年08期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 田代印;符州;王莉佳;何云鋒;王成秀;周娟;羅曉菊;;IL-13中和抗體對(duì)哮喘小鼠恢復(fù)期氣道炎癥及Th1／Th2功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

2 王雙;杜韞;孫志偉;;抗人腫瘤壞死因子α人源性中和抗體的研制[A];中國遺傳學(xué)會(huì)“發(fā)育、遺傳和疾病”研討會(huì)論文匯編集[C];2007年

3 譚斌;劉長明;冉多良;危艷武;張超范;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)持續(xù)感染與保護(hù)性免疫應(yīng)答機(jī)制[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第七次研討會(huì)論文集[C];2008年

4 高玉偉;夏咸柱;鞠會(huì)艷;賀文琦;楊松濤;黃耕;李德生;王鵬彥;;大熊貓血清犬瘟熱病毒中和抗體調(diào)查[A];第十一次全國養(yǎng)犬學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

5 張禎濤;王金寶;周順;李俊;宋玉才;劉長龍;徐文;倪嬌;;檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒中和抗體的重組GP5-ELISA的研究[A];第一屆中國養(yǎng)豬生產(chǎn)和疾病控制技術(shù)大會(huì)——2005中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

6 吳焱;倫文輝;趙剛;徐克沂;;R7V抗體及其對(duì)HIV長期感染不進(jìn)展者的意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)全國第九次感染病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

7 毛群穎;郭增兵;郝春生;于丹;李秀玲;梁爭論;;EV71疫苗中和試驗(yàn)檢測標(biāo)準(zhǔn)病毒候選株的研究[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

8 劉曄;張守峰;張菲;王穎;扈榮良;;動(dòng)物狂犬病中和抗體競爭ELISA檢測試劑盒的研制[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)成立大會(huì)暨第一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

9 韓振格;郄中宏;吳萍;滿霞;趙蘭靜;;體檢人群血清HBV中和抗體水平調(diào)查[A];療養(yǎng)康復(fù)發(fā)展的機(jī)遇與挑戰(zhàn)——中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會(huì)第21屆療養(yǎng)康復(fù)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

10 夏平安;崔保安;張紅英;楊霞;陳麗穎;王亞賓;王新衛(wèi);盧中華;;特異性中和抗體終止豬體內(nèi)PRRSV復(fù)制[A];第六屆全國會(huì)員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2005年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報(bào)記者 梁學(xué)梅;伍雪玲：發(fā)現(xiàn)抗艾滋病毒中和抗體的桂林人[N];桂林日報(bào);2011年

2 韋紹鋒 高飛;我國成功研制HIV中和抗體[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

3 段文利;SARS康復(fù)者體內(nèi)存在高水平中和抗體[N];健康報(bào);2007年

4 吳國彬;預(yù)防肉雞新城疫接種油苗好[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報(bào);2006年

5 吳國彬;肉雞：建議用ND油苗免疫[N];山東科技報(bào);2006年

6 段文利;我國SARS免疫學(xué)研究獲得重要進(jìn)展[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

7 曾耀英;HIV疫苗 研究思路[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2006年

8 欣信;HIV“中和抗體”真人露相[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

9 蔡小偉邋余榮華;福建治療禽流感科研獲國際性重大突破[N];人民日報(bào);2007年

10 記者 劉霞邋張巍巍;科學(xué)家鑒定出HIV病毒抑制基因[N];科技日報(bào);2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李娜;miR-34a抑制肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移和甲型減毒嵌合流感病毒誘導(dǎo)HIV-1廣譜中和抗體的分子機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2011年

2 郭東星;中國HIV-1流行株對(duì)廣譜中和抗體VRC01敏感性的分子機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

3 種輝輝;人類免疫缺陷病毒1型（HIV-1）假病毒檢測體系的建立與應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2008年

4 王倩;中國HIV/AIDS患者及疾病長期不進(jìn)展者中和抗體水平及其保守表位氨基酸變異研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

5 劉沐桑;HIV-1 V2區(qū)突變對(duì)抗V3區(qū)單克隆抗體逃逸的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

6 韋娜;A型肉毒毒素受體和中和抗體研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

7 丁惠;小干擾RNA在抗HCV感染中的應(yīng)用及HCV包膜蛋白E2誘導(dǎo)小鼠抗體應(yīng)答的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

8 王淵t，

本文編號(hào)：1136670