本文關(guān)鍵詞：多西環(huán)素調(diào)控的重組桿狀病毒載體Ac-EGFP及Ac-HGF的構(gòu)建

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【摘要】：目的將Tet-On系統(tǒng)與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)或肝細(xì)胞生長因子(HGF)共同構(gòu)建于一新型重組桿狀病毒載體,并以不同濃度的多西環(huán)素(DOX)調(diào)控EGFP及HGF表達(dá)。方法酶切重組質(zhì)粒pFast-Tet、pTRE-EGFP和pTRE-HGF,回收目的片段后連接pFast-Tet,分別轉(zhuǎn)化含有AcMNPV Bacmid和helper質(zhì)粒的DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞,篩選后提取Bacmid DNA并鑒定(命名為Ac-EGFP和Ac-HGF)。將Ac-EGFP和Ac-HGF轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,加入不同濃度的DOX調(diào)控EGFP(DOX濃度為0、200、500、1000ng/mL)和HGF(DOX濃度為0、10、100、500、1000、1200ng/mL)的表達(dá)。在熒光顯微鏡下觀察EGFP的表達(dá),用ELISA法檢測HGF的表達(dá)量。結(jié)果經(jīng)鑒定EGFP、HGF與Tet-On系統(tǒng)成功構(gòu)建在同一桿狀病毒載體,且在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中具有較高的轉(zhuǎn)染率。在較高濃度DOX調(diào)控下改造后的重組桿狀病毒可高表達(dá)EGFP和HGF,低濃度或無DOX時(shí)表達(dá)量逐漸減低。結(jié)論本研究證實(shí)可將Tet-On系統(tǒng)與EGFP或HGF共同構(gòu)建于一新型重組桿狀病毒載體,改造后的重組桿狀病毒能穩(wěn)定、高效轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,不同濃度的DOX可調(diào)控EGFP及HGF的表達(dá),無DOX時(shí)呈低本底。
【作者單位】： 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院骨科;贛州市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科;
【關(guān)鍵詞】： 增強(qiáng)型綠色熒光蛋白 肝細(xì)胞生長因子 Tet-on系統(tǒng) 骨髓 間質(zhì)干細(xì)胞 桿狀病毒
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81060147)~~
【分類號(hào)】：R341
【正文快照】： 桿狀病毒載體系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于表達(dá)外源性重組蛋白,在桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)內(nèi)構(gòu)建綠色熒光蛋白(GFP)或其他外源基因的轉(zhuǎn)移載體和重組病毒已有報(bào)道[1-2],但目前尚未有在同一桿狀病毒內(nèi)共同構(gòu)建四環(huán)素開關(guān)系統(tǒng)Tet-On與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)或肝細(xì)胞生長因子(HGF)的可調(diào)節(jié)桿狀病

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1076585