本文關(guān)鍵詞：增強(qiáng)的蛋白質(zhì)反式剪接作用提高肝臟靶向雙載體凝血第八因子轉(zhuǎn)基因小鼠的血漿凝血活性

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【摘要】：基于蛋白質(zhì)反式剪接的雙載體轉(zhuǎn)凝血第八因子(FⅧ)基因受到剪接效率低的不利影響,本研究旨在增強(qiáng)蛋白質(zhì)剪接元件蛋白內(nèi)含子(intein)之間的相互作用,通過改善蛋白質(zhì)反式剪接效率提高小鼠體內(nèi)雙載體轉(zhuǎn)FⅧ基因后血漿剪接FⅧ蛋白的分泌量和凝血活性.近期培養(yǎng)細(xì)胞水平證明,FⅧ重鏈和輕鏈分別進(jìn)行Cys點突變(Met226Cys和Asp1828Cys)后,可形成鏈間二硫鍵,并提高蛋白質(zhì)剪接效率產(chǎn)生更多的FⅧ蛋白.在此基礎(chǔ)上,將蛋白內(nèi)含子融合到含Cys點突變的人FⅧ重鏈和輕鏈基因,構(gòu)建一對表達(dá)載體,門靜脈注射C57BL/6小鼠進(jìn)行肝臟靶向轉(zhuǎn)基因.48h后分別檢測小鼠血漿中分泌的人FⅧ蛋白量和由其所產(chǎn)生的凝血活性,結(jié)果顯示FⅧ重鏈抗原分泌量為(442±151)ng/mL,凝血活性為(1.46±0.37)IU/mL,接近于單載體轉(zhuǎn)FⅧ基因產(chǎn)生的血漿凝血活性((1.79±0.59)IU/mL),明顯高于雙載體轉(zhuǎn)FⅧ基因?qū)φ招∈笱獫{的重鏈分泌量((305±103)ng/mL)和血漿凝血活性((0.85±0.23)IU/mL).結(jié)果表明,鏈間二硫鍵交聯(lián)可通過改善蛋白質(zhì)反式剪接效率提高雙載體轉(zhuǎn)FⅧ基因的功效.
【作者單位】： 魯東大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;煙臺毓璜頂醫(yī)院血液科;
【關(guān)鍵詞】： 凝血第八因子 蛋白質(zhì)反式剪接 雙載體轉(zhuǎn)基因 血漿凝血活性
【基金】：山東省自然科學(xué)基金(批準(zhǔn)號:ZR2010CM061) 教育部留學(xué)回國人員科研啟動基金(批準(zhǔn)號:20071108)資助項目
【分類號】：R341
【正文快照】： 運(yùn)用基于蛋白質(zhì)反式剪接的雙載體轉(zhuǎn)凝血第八因子(FⅧ)的重鏈和輕鏈基因,表達(dá)的重鏈和輕鏈多肽在蛋白內(nèi)含子(intein)介導(dǎo)的蛋白質(zhì)反式剪接作用下,形成完整的功能FⅧ蛋白,為利用雙AAV載體轉(zhuǎn)FⅧ基因,克服其容量限制、發(fā)揮其介導(dǎo)基因持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)等優(yōu)點提供了依據(jù)[1].盡管蛋白質(zhì)

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 朱甫祥;劉澤隆;繆靜;屈慧鴿;遲曉艷;;Met662和Asp1828的Cys突變增強(qiáng)蛋白內(nèi)含子對共表達(dá)的BDD-FVⅢ重鏈和輕鏈的剪接[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2012年03期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 朱甫祥;楊樹德;劉澤隆;屈慧鴿;遲曉艷;;vWF-△Pro改善基于蛋白質(zhì)剪接的雙載體BDD-FⅧ基因轉(zhuǎn)移[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2010年08期

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 朱甫祥;楊樹德;劉澤隆;繆靜;屈慧鴿;遲曉艷;;酸性區(qū)3融合重鏈促進(jìn)基于蛋白質(zhì)內(nèi)含子的雙載體B域缺失型凝血因子Ⅷ轉(zhuǎn)基因表達(dá)[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2010年11期

2 朱甫祥;楊樹德;劉澤隆;繆靜;屈慧鴿;遲曉艷;;內(nèi)含肽介導(dǎo)三段vWF基因真核細(xì)胞轉(zhuǎn)移的翻譯后連接及其功能性多聚體形成[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2011年01期

3 朱甫祥;楊樹德;劉澤隆;繆靜;屈慧鴿;遲曉艷;;二硫鍵形成促進(jìn)雙載體轉(zhuǎn)斷裂B區(qū)缺失型凝血因子Ⅷ基因[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2012年02期

4 朱甫祥;劉澤隆;屈慧鴿;遲曉艷;;內(nèi)含肽介導(dǎo)F309SfVⅢ的連接和重鏈分泌的增強(qiáng)[J];生理學(xué)報;2009年06期

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本文編號：1041271