本文關(guān)鍵詞：慢病毒載體介導(dǎo)apelin基因轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的實驗研究

  更多相關(guān)文章： 間質(zhì)干細(xì)胞 慢病毒屬 遺傳載體 轉(zhuǎn)染 基因表達(dá) apelin

【摘要】：目的構(gòu)建帶有熒光標(biāo)記基因增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)和apelin基因的重組質(zhì)粒pUbi-apelinFLAG-pSV40-EGFP并進(jìn)行慢病毒包裝,探討其轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的最佳感染復(fù)數(shù)(MOI)值及目的基因表達(dá)情況。方法化學(xué)合成目的基因片段并擴(kuò)增。采用In-Fusion技術(shù)將酶切后的目的基因片段與線性質(zhì)粒載體連接,轉(zhuǎn)化入感受態(tài)DH5α細(xì)胞中后篩選陽性克隆并進(jìn)行測序。重組質(zhì)粒慢病毒載體轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,包裝慢病毒并測定滴度。將重組質(zhì)粒慢病毒按不同MOI值轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,根據(jù)轉(zhuǎn)染效率得到最佳MOI值,并采用Real-timePCR及Western blot方法檢測目的基因表達(dá)情況。結(jié)果通過PCR擴(kuò)增獲得酶切位點堿基修飾后的大小約284 bp的目的基因片段,與慢病毒質(zhì)粒載體連接后形成pUbi-apelin-FLAG-pSV40-EGFP重組質(zhì)粒,測序結(jié)果與預(yù)期完全符合,并成功包裝慢病毒顆粒。最佳MOI值為20,轉(zhuǎn)染效率為(90.32±3.61)%。慢病毒載體能高效轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞且2周內(nèi)持續(xù)穩(wěn)定上調(diào)目的基因mRNA及蛋白的表達(dá)。結(jié)論重組質(zhì)粒慢病毒載體pUbi-apelin-FLAGpSV40-EGFP可有效轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,并可持續(xù)高表達(dá)apelin基因。
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學(xué)海軍臨床醫(yī)學(xué)院;中國人民解放軍海軍總醫(yī)院心臟中心;
【關(guān)鍵詞】： 間質(zhì)干細(xì)胞 慢病毒屬 遺傳載體 轉(zhuǎn)染 基因表達(dá) apelin
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(項目編號:81170094)
【分類號】：R329
【正文快照】： 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cordmesenchymal stem cells,hUCMSCs)表達(dá)多種胚胎干細(xì)胞的特有分子標(biāo)志,具有分化潛力大、增殖能力強(qiáng)、免疫原性低、取材方便的優(yōu)勢,且無倫理道德問題的限制,在體外誘導(dǎo)條件下可向骨、軟骨、脂肪、神經(jīng)、肌肉、韌帶和肌腱等組織細(xì)胞分化[

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：1041401