發(fā)布時間：2017-10-16 07:35

  本文關鍵詞：慢病毒載體介導apelin基因轉染人臍帶間充質干細胞的實驗研究

  更多相關文章： 間質干細胞 慢病毒屬 遺傳載體 轉染 基因表達 apelin

【摘要】：目的構建帶有熒光標記基因增強型綠色熒光蛋白(EGFP)和apelin基因的重組質粒pUbi-apelinFLAG-pSV40-EGFP并進行慢病毒包裝,探討其轉染人臍帶間充質干細胞的最佳感染復數(shù)(MOI)值及目的基因表達情況。方法化學合成目的基因片段并擴增。采用In-Fusion技術將酶切后的目的基因片段與線性質粒載體連接,轉化入感受態(tài)DH5α細胞中后篩選陽性克隆并進行測序。重組質粒慢病毒載體轉染293T細胞,包裝慢病毒并測定滴度。將重組質粒慢病毒按不同MOI值轉染人臍帶間充質干細胞,根據(jù)轉染效率得到最佳MOI值,并采用Real-timePCR及Western blot方法檢測目的基因表達情況。結果通過PCR擴增獲得酶切位點堿基修飾后的大小約284 bp的目的基因片段,與慢病毒質粒載體連接后形成pUbi-apelin-FLAG-pSV40-EGFP重組質粒,測序結果與預期完全符合,并成功包裝慢病毒顆粒。最佳MOI值為20,轉染效率為(90.32±3.61)%。慢病毒載體能高效轉染人臍帶間充質干細胞且2周內持續(xù)穩(wěn)定上調目的基因mRNA及蛋白的表達。結論重組質粒慢病毒載體pUbi-apelin-FLAGpSV40-EGFP可有效轉染人臍帶間充質干細胞,并可持續(xù)高表達apelin基因。
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學海軍臨床醫(yī)學院;中國人民解放軍海軍總醫(yī)院心臟中心;
【關鍵詞】： 間質干細胞 慢病毒屬 遺傳載體 轉染 基因表達 apelin
【基金】：國家自然科學基金面上項目(項目編號:81170094)
【分類號】：R329
【正文快照】： 人臍帶間充質干細胞(human umbilical cordmesenchymal stem cells,hUCMSCs)表達多種胚胎干細胞的特有分子標志,具有分化潛力大、增殖能力強、免疫原性低、取材方便的優(yōu)勢,且無倫理道德問題的限制,在體外誘導條件下可向骨、軟骨、脂肪、神經(jīng)、肌肉、韌帶和肌腱等組織細胞分化[

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本文編號：1041401