電離輻射誘導(dǎo)旁效應(yīng)的另一種機(jī)制.pdf 全文免費(fèi)在線閱讀
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外泌體—電離輻射誘導(dǎo)旁效應(yīng)的另一種機(jī)制中文摘要I中文摘要目的:首先驗(yàn)證電離輻射是否在H460非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中誘導(dǎo)經(jīng)培養(yǎng)液介導(dǎo)的旁效應(yīng);進(jìn)而探索除細(xì)胞間隙連接和可溶性分子兩種信號(hào)介導(dǎo)方式外的新的旁效應(yīng)信號(hào)介導(dǎo)機(jī)制。在文獻(xiàn)調(diào)研與預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)之上,探索外泌體是否為電離輻射誘導(dǎo)旁效應(yīng)的一種介導(dǎo)機(jī)制。方法:采用條件培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移的方法,以DNA損傷、微核形成和克隆形成為指標(biāo),檢測X射線在H460非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中誘導(dǎo)經(jīng)培養(yǎng)液介導(dǎo)的旁效應(yīng)。采用差速離心法從未輻照和輻照后的H460細(xì)胞培養(yǎng)液中提取、純化外泌體,通過透射電子顯微鏡觀察其形態(tài),激光粒度儀分析粒徑分布,并用WesternBlot檢測其標(biāo)志蛋白hsp90β的表達(dá)。另外,檢測不同照射劑量以及照射后不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞分泌外泌體的粒徑分布。通過熒光探針共定位實(shí)驗(yàn)觀察外泌體進(jìn)入接收細(xì)胞。采用結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)檢測外泌體對(duì)接收細(xì)胞增殖的影響,同時(shí)檢測外泌體對(duì)接收細(xì)胞微核形成和克隆形成能力的影響。為探索外泌體中的RNA是否對(duì)引起接收細(xì)胞產(chǎn)生生物學(xué)變化發(fā)揮重要作用,預(yù)先將RNA酶與外泌體孵育以滅活外泌體內(nèi)RNA,去除殘留RNA酶后,將外泌體加入接收細(xì)胞中,觀察接收細(xì)胞微核形成率的變化。本研究采用Origin8軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、分析和作圖...
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本文編號(hào):163403
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