發(fā)布時間：2025-02-09 17:32

　　產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)是創(chuàng)傷性氣性壞疽和人類食物中毒以及動物壞死性腸炎、腸毒血癥的主要病原菌之一。產(chǎn)氣莢膜梭菌主要的致病因子是其分泌的外毒素,種類多達13種,其中α、β、ε和t是最主要的外毒素,根據(jù)產(chǎn)生外毒素的種類不同,可分為A、B、C、D和E5個血清型,其中α毒素(C. perfringens alpha toxin, CPA)是各型產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生的共同毒力因子,也是A型菌產(chǎn)生的最主要毒素,不僅能破壞細胞膜的完整性,導(dǎo)致細胞裂解,而且具有細胞毒性、溶血性、致死性和皮膚壞死性等特性。β2毒素(C.perfringens beta2toxin, cpb2),是由B型和C型菌產(chǎn)生的一種強毒素,作為C型產(chǎn)氣莢膜梭菌主要毒力因子之一,具有細胞毒性和致死性,可產(chǎn)生溶血性壞死和壞死性腸炎,該型病菌可引發(fā)多種畜禽的腸炎和腸毒血癥。ε毒素由B型和D型產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生的毒素,是D型菌的主要毒素。β1毒素是一種壞死性和致死性毒素,它們是引起仔豬紅痢的主要致病因子,該病具有很高的發(fā)病率和死亡率。為有效預(yù)防由多型產(chǎn)氣莢膜梭菌所引起的疾病,制備多種毒素的免疫原,抵抗異源毒...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 產(chǎn)氣莢膜梭菌感染及病原學(xué)研究進展
        1.1.1 產(chǎn)氣莢膜梭菌致病機制
    1.2 產(chǎn)氣莢膜梭菌分類及其引起的相關(guān)疾病
    1.3 產(chǎn)氣莢膜梭菌疫苗的研究進展
        1.3.1 a毒素疫苗的研究進展
        1.3.2 β毒素疫苗的研究進展
        1.3.3 ε毒素疫苗的研究進展
    1.4 乳酸菌作為疫苗載體的研究進展
        1.4.1 乳酸桿菌作為黏膜免疫活載體疫苗的優(yōu)勢
        1.4.2 重組乳酸桿菌作為活載體疫苗的研究進展
        1.4.3 乳酸菌口服疫苗的展望
    1.5 研究目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 質(zhì)粒和菌種
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 引物合成
        2.1.4 試劑
        2.1.5 血清
        2.1.6 主要實驗儀器與設(shè)備
    2.2 試驗方法
        2.2.1 表達產(chǎn)氣莢膜梭菌α-β2-ε-β1毒素融合基因重組大腸桿菌的構(gòu)建
        2.2.2 重組大腸桿菌的誘導(dǎo)表達及鑒定
        2.2.3 表達產(chǎn)氣莢膜梭菌α-β2-ε-β1毒素融合基因重組干酪乳桿菌的構(gòu)建及鑒定
        2.2.4 重組干酪乳桿菌的誘導(dǎo)表達及鑒定
        2.2.5 口服重組干酪乳桿菌特異性抗體的測定
        2.2.6 毒素中和試驗
3 實驗結(jié)果
    3.1 目的基因α-β2,ε,β1的PCR擴增結(jié)果
    3.2 重組菌表達載體的鑒定
        3.2.1 大腸桿菌重組表達載體pProHTa-α-β2-ε-β1鑒定結(jié)果
        3.2.2 干酪乳桿菌重組載體pPG-2-α-β2-ε-β1的鑒定結(jié)果
    3.3 重組大腸桿菌的誘導(dǎo)表達鑒定結(jié)果
        3.3.1 SDS-PAGE結(jié)果
        3.3.2 Western blot鑒定
    3.4 重組干酪乳桿菌的誘導(dǎo)表達鑒定結(jié)果
        3.4.1 Western blot鑒定結(jié)果
    3.5 重組干酪乳桿菌口服免疫小鼠特異性抗體檢測結(jié)果
        3.5.1 小鼠糞便特異性sIgA檢測結(jié)果
        3.5.2 小鼠血清中特異性IgG檢測結(jié)果
        3.5.3 免疫小鼠淚液、陰道黏液中特異性sIgA測定結(jié)果
    3.6 攻毒保護性試驗結(jié)果
        3.6.1 毒素毒力的測定結(jié)果
        3.6.2 攻毒試驗結(jié)果
    3.7 血清抗體中和效力的測定結(jié)果
4 討論
    4.1 以α-β2-ε-β1毒素為免疫原構(gòu)建重組乳酸桿菌的設(shè)計思路
    4.2 分泌型干酪乳桿菌作為遞呈抗原載體的優(yōu)勢
    4.3 口服重組干酪乳桿菌的免疫效果分析
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：4032608