副豬嗜血桿菌是引起格拉澤氏病的病原體,該病嚴(yán)重地威脅著全世界范圍內(nèi)的豬群,給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,臨診上多表現(xiàn)為多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎。眾所周知,副豬嗜血桿菌只有抵抗了宿主肺臟的吞噬作用才能產(chǎn)生系統(tǒng)性疾病,而肺臟的第一個(gè)防御機(jī)制是豬肺泡巨噬細(xì)胞,它在清除風(fēng)媒傳播的病原體和其他環(huán)境微生物中發(fā)揮了重要作用。有趣的是,高毒力副豬嗜血桿菌能夠阻止豬肺泡巨噬細(xì)胞的吞噬作用,然而低毒力菌株則被豬肺泡巨噬細(xì)胞吞噬并清除。最近有文獻(xiàn)報(bào)道稱副豬嗜血桿菌感染PK-15細(xì)胞能夠激活NF-κB信號(hào)通路,其機(jī)制是促進(jìn)IκB的降解和p65的磷酸化,繼而刺激多種炎性因子的產(chǎn)生介導(dǎo)炎性應(yīng)答。然而,副豬嗜血桿菌感染的致病機(jī)制還不甚清楚。 Coronin1A蛋白是哺乳動(dòng)物coronin蛋白質(zhì)家族的一員,也稱為T(mén)ACO或p57蛋白,主要表達(dá)于造血組織及細(xì)胞中,主要分布于細(xì)胞胞漿中。Coronin1A被認(rèn)為在T淋巴細(xì)胞活化、遷移、存活和鈣離子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮了重要作用。先前的文獻(xiàn)報(bào)道稱人源Coronin1A與致病性結(jié)核分枝桿菌在機(jī)體內(nèi)存活有關(guān),其中Coronin1A在結(jié)核分枝桿菌感染過(guò)程中主要參與調(diào)節(jié)吞噬小體與溶...

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表
1. 文獻(xiàn)綜述
    1.1 副豬嗜血桿菌病
        1.1.1 病原學(xué)
        1.1.2 流行病學(xué)特征
        1.1.3 副豬嗜血桿菌診斷技術(shù)研究進(jìn)展
        1.1.4 致病機(jī)理研究進(jìn)展
    1.2 Coronin蛋白質(zhì)家族
        1.2.1 Coronin蛋白質(zhì)的家族成員、命名與表達(dá)模式
        1.2.2 Coronin蛋白質(zhì)的定位與基本功能
        1.2.3 Coronin蛋白質(zhì)發(fā)揮功能的生化機(jī)制研究進(jìn)展
        1.2.4 Coronin 1A基因研究進(jìn)展
2. 研究目的與意義
3. 材料與方法
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 菌種、質(zhì)粒與細(xì)胞
        3.1.2 工具酶及主要試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)器材
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.5 培養(yǎng)基與抗生素及其配制
        3.1.6 主要緩沖液與相關(guān)試劑及其配制
        3.1.7 分子生物學(xué)分析軟件
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 豬Coronin 1A基因的克隆
        3.2.2 原核重組質(zhì)粒的構(gòu)建及測(cè)序
        3.2.3 豬Coronin 1A蛋白的表達(dá)、純化與鑒定
        3.2.4 豬Coronin 1A蛋白的多克隆抗體制備
        3.2.5 Anti-Coronin 1A多克隆抗體的ELISA檢測(cè)
        3.2.6 豬Coronin 1A在副豬嗜血桿菌(HPS)感染后的免疫組化分析
        3.2.7 Coronin 1A基因在豬重要組織及細(xì)胞系中的特異性分布
        3.2.8 LPS和Poly(I：C)刺激誘導(dǎo)PK-15細(xì)胞表達(dá)豬Coronin 1A基因
        3.2.9 真核質(zhì)粒的構(gòu)建與測(cè)序
        3.2.10 豬Coronin 1A基因在PK-15細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位
        3.2.11 質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染(脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法)
        3.2.12 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        3.2.13 Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中各蛋白的表達(dá)情況
        3.2.14 熒光定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中IL-6、IL-8和COX-2表達(dá)水平
        3.2.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
4. 結(jié)果和分析
    4.1 豬Coronin 1A基因克隆與序列分析
        4.1.1 豬Coronin 1A基因克隆
        4.1.2 豬Coronin 1A基因的序列分析
    4.2 豬Coronin 1A基因的真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建
    4.3 豬Coronin 1A基因在健康豬不同組織以及細(xì)胞系中的表達(dá)水平
    4.4 LPS和Poly(I：C)刺激PK-15細(xì)胞表達(dá)Coronin 1A基因
    4.5 豬Coronin 1A基因的亞細(xì)胞定位
    4.6 豬Coronin 1A蛋白的原核表達(dá)、純化與Western blot鑒定分析
        4.6.1 豬Coronin 1A蛋白的原核表達(dá)與純化
        4.6.2 豬Coronin 1A蛋白的Western blot鑒定分析
    4.7 豬Coronin 1A蛋白的抗血清效價(jià)測(cè)定
    4.8 感染副豬嗜血桿菌豬的重要組織中Coronin 1A表達(dá)水平
    4.9 感染副豬嗜血桿菌豬肺泡巨噬細(xì)胞中的Coronin 1A基因互作網(wǎng)絡(luò)分析
    4.10 感染副豬嗜血桿菌豬肺泡巨噬細(xì)胞中的Coronin 1A亞細(xì)胞定位
    4.11 豬Coronin 1A基因與NF-κB相互作用的初步研究
        4.11.1 豬Coronin 1A抑制NF-κB途徑
        4.11.2 豬Coronin 1A抑制IκBa的降解與p65的核轉(zhuǎn)位
        4.11.3 豬Coronin 1A抑制NF-κB下游調(diào)控的促炎性因子表達(dá)
    4.12 豬Coronin 1A在副豬嗜血桿菌感染過(guò)程中調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路
5. 討論
    5.1 豬Coronin 1A在副豬嗜血桿菌感染過(guò)程中可能與阻止吞噬溶酶體的形成有關(guān)
    5.2 豬Coronin 1A在副豬嗜血桿菌感染過(guò)程中調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路
6. 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：4027929