新型鴨呼腸孤病毒(NDRV)病,是一種以肝脾不規(guī)則壞死、出血斑/點(diǎn)和心肌、腔上囊出血為主要特征的新疫病。為研究某養(yǎng)鴨企業(yè)不同年份分離的NDRV病株的生物學(xué)特性,本研究將2019年從25份櫻桃谷鴨臟器組織中分離的3株病毒以及2016年和2017年分離的2株病毒同時(shí)進(jìn)行了生物學(xué)特性比較研究。RT-PCR及基因測(cè)序結(jié)果表明,該5株分離病毒均為NDRV,且純凈性良好。體外復(fù)制研究表明,該5株分離病毒均能100%致死雞胚,且在Vero細(xì)胞中增殖良好;除2017年的分離株外,其余4株分離病毒均能在CEF中產(chǎn)生明顯的細(xì)胞病變。σC基因同源性及遺傳進(jìn)化分析顯示,5株NDRV分離株與其它NDRV病毒株之間具有較高的同源性(90.0%～98.2%),而與番鴨呼腸孤病毒(MDRV)同源性較低(29.6%～46.1%),再次證明5株分離病毒均為NDRV,但2017年分離株NDRV-SD19/6202與其余4株病毒的遺傳距離稍遠(yuǎn)。σC基因編碼氨基酸序列分析結(jié)果顯示,以CEF適應(yīng)病毒為代表的NDRV-SD19/6201株與CEF非適應(yīng)病毒NDRV-SD19/6202株之間存在13個(gè)氨基酸差異位點(diǎn),但這些差異位點(diǎn)是...

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圖1 NDRV分離病毒體外感染細(xì)胞后的CPE觀察

分別將5株NDRV分離病毒接種原代CEF及傳代Vero細(xì)胞，觀察其CPE。結(jié)果顯示，NDRV-SD19/6304、NDRV-SD19/6307、NDRV-SD19/7304及NDRV-SD19/6201株病毒在兩種細(xì)胞中均可增殖，產(chǎn)生明顯CPE（圖1）。而NDRV-SD19/62....

圖2 5株分離病毒的σC基因的RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果

利用本研究設(shè)計(jì)合成的NDRVσC基因的特異性引物，對(duì)上述5株分離病毒進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增。結(jié)果顯示均可獲得約1000bp的目的條帶，與預(yù)期一致（圖2）。以上結(jié)果進(jìn)一步表明，分離的5株病毒均為NDRV。2.7分離病毒σC基因同源性及遺傳進(jìn)化分析

圖4 兩株NDRV分離病毒σC基因編碼氨基酸序列的比對(duì)分析

為進(jìn)一步探究造成上述分離株在CEF中復(fù)制差異產(chǎn)生的原因，本研究選取NDRV-SD19/6201作為適應(yīng)CEF增殖的代表株，與非適應(yīng)CEF增殖的NDRV-SD19/6202株的σC蛋白氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示兩株病毒之間共存在13個(gè)差異位點(diǎn)。有研究報(bào)道顯示，σCC端的aa15....

圖3 NDRV分離株的σC基因核苷酸序列遺傳進(jìn)化分析

利用Multalin在線軟件對(duì)在CEF中復(fù)制特性不同的兩株分離病毒NDRV-SD19/6201與NDRV-SD19/6202的σC基因編碼氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)分析，結(jié)果顯示兩者之間存在13個(gè)氨基酸差異位點(diǎn)，分別位于第P9L、Y16C、T25K、I64T、E65D、L66M、G74S....

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