以決定流行性出血病病毒(EHDV)血清型的第二基因節(jié)段(Seg-2)為檢測靶基因,設計7對特異性引物,建立用于鑒定EHDV血清型的RT-PCR檢測方法,并通過對擴增產物的測序,進一步了解病毒Seg-2的遺傳特性。特異性試驗結果顯示,該檢測方法可準確鑒定不同血清型的EHDV毒株,與藍舌病病毒、中山病病毒、阿卡斑病毒均無交叉反應;靈敏度試驗結果顯示,對不同血清型EHDV核酸的檢測下限均可達10～2拷貝;對我國不同時間與不同地域分離的EHDV毒株進行血清型RT-PCR鑒定,結果顯示分離的31株EHDV分屬EHDV-1、-5、-6、-7與-10型等5種血清型,與血清中和試驗的鑒定結果完全吻合。以上結果表明,該方法具有良好的特異性和較高的靈敏度,可快速準確地鑒定EHDV毒株的血清型。

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

圖1 不同血清型EHDV PCR檢測結果

取不同血清型EHDV代表毒株(EHDV-1、-2、-5、-6、-7、-8和-10血清型毒株)cDNA為模板,用對應的血清型特異性引物進行PCR擴增,同時每種血清型均設立陰性對照。結果顯示7種血清型EHDVSeg-2的擴增產物大小在800～1200bp,每種血清型陰性對照(N....

圖2 EHDV血清型引物特異性檢測

以BTV、AKAV、CHUV和7種血清型EHDV(EHDV-1、-2、-5、-6、-7、-8和-10)的cDNA為模板,分別使用表2中不同血清型EHDV鑒定引物(P1～P10)進行PCR擴增,均設立陰性對照,分析引物的特異性。結果顯示:EHDV血清型RT-PCR引物僅與對應血清型....

圖3 EHDV血清型引物靈敏度檢測

通過絕對定量qPCR計算出EHDV-1、EHDV-2、EHDV-5、EHDV-6、EHDV-7、EHDV-8和EHDV-10不同血清型EHDV代表毒株的cDNA拷貝數(shù)分別為1.1×109、1.4×1010、1.2×1011、3.6×1010、2.4×1010、8.7×108和2.....

圖4 基于NJ法的EHDV 參考毒株和中國毒株Seg-2序列的系統(tǒng)發(fā)育分析

目前血清中和試驗是國際上血清檢測的金標準,但該方法有操作要求高、檢測時間長和必須獲得血清型完整的標準毒株或血清等缺點,不利于EHDV血清型的快速鑒定。而病毒核酸的分子檢測具有操作簡便、檢測樣本量多、準確和快速等優(yōu)點,已被廣泛應用于各類疾病的快速診斷及血清型鑒定等方面。本研究以我國....

本文編號：4020382