為評價A型口蹄疫疫苗免疫水平,本研究以本實驗室前期制備的口蹄疫病毒(FMDV)的單克隆抗體(MAb)3D9為捕獲抗體,以HRP標(biāo)記的MAb 9A9作為檢測抗體,建立了基于MAb的檢測A型FMDV抗體的固相競爭ELISA(SPCE)方法,并對其條件進行優(yōu)化。結(jié)果顯示,MAb 3D9的包被濃度為1.16μg/mL,A型FMDV抗原的最佳稀釋度為1:5,HRP標(biāo)記的MAb 9A9的最佳稀釋度為1:5 000,當(dāng)血清132稀釋時,檢測的臨界值確定為35%。利用該方法分別檢測A型、O型口蹄疫抗體陽性標(biāo)準(zhǔn)血清以及牛冠狀病毒、牛輪狀病毒以及豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒、豬圓環(huán)病毒、豬瘟病毒的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清。結(jié)果顯示,除A型口蹄疫陽性標(biāo)準(zhǔn)血清為陽性結(jié)果外其余均為陰性結(jié)果,未出現(xiàn)交叉反應(yīng),表明本研究建立的方法特異性強。該方法對經(jīng)病毒中和試驗(VNT)檢測為陽性的3份血清進行敏感性試驗,敏感性分別為1:1 024、1:256、1:128,均高于VNT,表明其敏感性較高;重復(fù)性試驗結(jié)果顯示,該方法批內(nèi)和批間重復(fù)試驗的變異系數(shù)均小于10%,表明其重復(fù)性較好。利用該方法與液相阻斷ELISA方法(LPBE)和VNT對...

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取3份經(jīng)VNT檢測為陽性的血清樣品2倍倍比稀釋后，經(jīng)本研究建立的SPCE方法檢測，評估該方法的敏感性，結(jié)果顯示，ELISA檢測血清樣品的OD450nm值隨著陽性血清稀釋倍數(shù)增加，其OD450nm值平緩遞減，且與VNT測定的效價呈正相關(guān)。當(dāng)樣品1稀釋至1:1024時，計算得到的P....

圖1陰性血清和陽性血清的PI值分布圖2.5SPCE的重復(fù)性試驗結(jié)果

本文編號：4008881