豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）屬于圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬，是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、皮炎腎病綜合征（PDNS）和母豬繁殖障礙等癥狀的主要病原物，所有這些癥狀被統(tǒng)稱為豬圓環(huán)病毒相關病(PCVAD)。自1991年PMWS在加拿大被首次報道至今，該病目前已經(jīng)遍布世界各地，在我國豬群中感染發(fā)病情況也十分普遍，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失。 PCV2無囊膜，其基因組為共價閉合、單股環(huán)狀負鏈DNA，大小約1.76kb。PCV2ORF2編碼的的結構蛋白Cap是其最主要的免疫保護性抗原，能誘導動物機體產(chǎn)生特異性中和抗體，是研制PCV2新型疫苗的理想靶抗原。國內(nèi)外現(xiàn)有的PCV2商品化疫苗因其工藝繁瑣、價格昂貴限制了疫苗的普及應用。 新城疫病毒（NDV）反向遺傳操作技術的發(fā)展為NDV作為疫苗載體防制哺乳動物疾病開辟了道路。本研究的目的是為了探索PCV2的衣殼蛋白重組NDV后在哺乳動物細胞中的表達情況，從而為研制新型PCV2疫苗提供一種思路。 本研究利用NDV La Sota弱毒疫苗株的反向遺傳操作平臺，成功構建表達PCV2aCap蛋白的重組病毒rLa-PCV2/Cap；為了進一步增...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
英文縮略表
1 引言
    1.1 病原學
    1.2 流行病學
    1.3 臨診癥狀及病理變化
    1.4 PCV2 的致病機理
    1.5 PCV2 的分子生物學
    1.6 PCV2 疫苗研究進展
        1.6.1 PCV2 滅活疫苗
        1.6.2 PCV2 弱毒疫苗
        1.6.3 PCV2 基因工程疫苗
    1.7 NDV 作為活病毒
2 材料與方法
    2.1 細胞、病毒和質(zhì)粒
    2.2 高免血清及實驗動物
    2.3 主要試劑與儀器
    2.4 方法
        2.4.1 引物設計與合成
        2.4.2 cap 及其改造后基因的擴增和序列分析
        2.4.3 重組病毒基因組全長 cDNA 的構建
        2.4.4 病毒的拯救
        2.4.5 重組病毒的 RT-PCR 鑒定
        2.4.6 重組病毒的間接免疫熒光試驗（IFA）
        2.4.7 重組病毒在雞胚內(nèi)生長特性測定
        2.4.8 重組病毒致病性實驗
            2.4.8.1 雞胚平均致死時間（MDT）測定
            2.4.8.2 重組病毒的雞腦內(nèi)致病指數(shù)（ICPI）測定
            2.4.8.3 重組病毒的靜脈內(nèi)致病指數(shù)（IVPI）測定
3 結果與分析
    3.1 重組 NDV 基因組全長 cDNA 的構建
    3.2 重組病毒的拯救
    3.3 重組病毒 RT-PCR 鑒定
    3.4 IFA 檢測外源蛋白表達
        3.4.1 IFA 檢測 PCV2-Cap 蛋白的表達
        3.4.2 IFA 檢測改造后 Cap 蛋白的表達
    3.5 重組病毒雞胚內(nèi)的生長特性
    3.6 重組病毒的致病性實驗
4 討論
5 結論
參考文獻
作者簡介
致謝



本文編號：4011554