在集約化畜禽養(yǎng)殖業(yè)中,抗生素不僅用于治療和預(yù)防動(dòng)物疾病,還被用作動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑添加在飼料中,導(dǎo)致養(yǎng)殖場(chǎng)的畜禽糞便中含有大量抗生素殘留。養(yǎng)殖業(yè)產(chǎn)生的糞肥經(jīng)處理后,常被用作綠色有機(jī)肥用于改良土壤、提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)。由于我國(guó)現(xiàn)行的有機(jī)肥標(biāo)準(zhǔn)并未將抗生素殘留指標(biāo)列入,有機(jī)肥中抗生素的殘留狀況仍不清楚。有機(jī)肥中所含的抗生素及抗生素抗性基因向土壤環(huán)境中釋放和遷移,導(dǎo)致產(chǎn)生新的環(huán)境問(wèn)題。另外,近幾年來(lái)一些文獻(xiàn)報(bào)道植物內(nèi)生細(xì)菌含有多重抗生素抗性,其抗生素抗性基因的來(lái)源和產(chǎn)生機(jī)制仍不清楚。本文對(duì)南京市銷售的商品有機(jī)肥中的抗生素殘留和抗生素抗性基因進(jìn)行了檢測(cè)；在土壤中添加抗生素,檢測(cè)土壤中和在其上盆栽的生菜中抗生素及抗生素抗性基因的變化并分析兩者之間的相關(guān)性。本研究對(duì)研究抗生素及其抗性基因在環(huán)境中,特別是食物鏈中的遷移變化規(guī)律有重要價(jià)值。對(duì)南京市8種商品有機(jī)肥中的18種獸藥抗生素和相關(guān)抗生素抗性基因進(jìn)行檢測(cè)。除磺胺類抗生素、金霉素和泰樂(lè)菌素,其他抗生素均有不同程度的檢出。其中恩諾沙星、四環(huán)素和羅紅霉素在所測(cè)8種有機(jī)肥中均有檢出,恩諾沙星的檢出濃度為24.3～225.5μg·kg-1,四環(huán)素為13.9～9...

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮寫
第一章 前言
    一、環(huán)境中的抗生素
    二、新型環(huán)境污染物—抗生素抗性基因
        (一) ARGs儲(chǔ)存庫(kù)的形成
        (二) ARGs的傳播擴(kuò)散途徑
    三、喹諾酮類抗生素概述
        (一) 喹諾酮類抗生素的分類
        (二) 喹諾酮類抗生素的作用機(jī)制
        (三) 喹諾酮類抗生素的使用
    四、質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮抗性基因
        (一) PMQR基因的分類及其耐藥機(jī)制
        (二) PMQR基因的流行
    五、有機(jī)肥源抗生素污染的研究
    六、抗生素和ARGs向植物傳播的研究
    七、本論文的研究思路
第二章 有機(jī)肥中典型抗生素殘留測(cè)定及相關(guān)ARGs檢測(cè)
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 供試材料
        1.2 藥品試劑
        1.3 儀器設(shè)備
        1.4 溶液及培養(yǎng)基配制
        1.5 酶及引物
        1.6 其他材料
        1.7 菌株培養(yǎng)與保藏
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 有機(jī)肥中四類典型抗生素殘留的同時(shí)測(cè)定
            2.1.1 樣品前處理
            2.1.2 UPLC-MS/MS檢測(cè)
        2.2 有機(jī)肥DNA的提取及抗性基因檢測(cè)
            2.2.1 有機(jī)肥DNA的提取
            2.2.2 ARGs檢測(cè)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 有機(jī)肥中抗生素的檢測(cè)
            3.1.1 線性方程和檢出限
            3.1.2 南京市售有機(jī)肥中4類抗生素檢測(cè)
        3.2 有機(jī)肥DNA提取及ARGs測(cè)定
            3.2.1 有機(jī)肥DNA提取方法的優(yōu)化
            3.2.2 ARGs的檢測(cè)
    4 討論
第三章 土壤中添加思諾沙星對(duì)生菜內(nèi)生細(xì)菌抗性基因qnrA、qnrB的影響
    第一節(jié) PMQR基因陽(yáng)性克隆構(gòu)建與qPCR方法的建立
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 菌種和質(zhì)粒
            1.2 藥品試劑
            1.3 儀器設(shè)備
            1.4 溶液和培養(yǎng)基配制
            1.5 酶及引物
            1.6 其他材料
            1.7 菌株培養(yǎng)與保藏
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 陽(yáng)性克隆的構(gòu)建
                2.1.1 目的DNA的擴(kuò)增
                2.1.2 PCR產(chǎn)物純化回收
                2.1.3 PCR產(chǎn)物裝TA克隆
                2.1.4 感受態(tài)細(xì)胞制備及轉(zhuǎn)化
                2.1.5 陽(yáng)性克隆的篩選及雙酶切驗(yàn)證
                2.1.6 PCR擴(kuò)增與測(cè)序驗(yàn)證
            2.2 熒光實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)
                2.2.1 qPCR方法
                2.2.2 qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3 結(jié)果與分析
            3.1 陽(yáng)性克隆的篩選
            3.2 qPCR方法
    第二節(jié) 生菜盆栽試驗(yàn)及相關(guān)數(shù)據(jù)測(cè)定
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 供試材料
            1.2 藥品試劑
            1.3 儀器設(shè)備
            1.4 溶液及培養(yǎng)基配制
            1.5 酶及引物
            1.6 其他材料
            1.7 菌株培養(yǎng)與保藏
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.2 化學(xué)分析方法
                2.2.1 土壤中恩諾沙星及環(huán)丙沙星的提取
                2.2.2 生菜中恩諾沙星及環(huán)丙沙星的提取
                2.2.3 UPLC-MS/MS檢測(cè)
            2.3 抗性基因的定量
                2.3.1 土壤DNA的提取
                2.3.2 生菜葉片內(nèi)生細(xì)菌的富集及DNA的提取
                2.3.3 qPCR定量
            2.4 內(nèi)生細(xì)菌的分離和鑒定
                2.4.1 內(nèi)生細(xì)菌分離
                2.4.2 內(nèi)生細(xì)菌菌種鑒定
                2.4.3 抗生素敏感性實(shí)驗(yàn)
            2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 土壤和生菜中的恩諾沙星及環(huán)丙沙星
                3.1.1 檢測(cè)限與定量限
                3.1.2 檢測(cè)結(jié)果
            3.2 土壤和生菜葉片內(nèi)生細(xì)菌的PMQR基因的定量檢測(cè)
                3.2.1 qPCR引物
                3.2.2 qPCR檢測(cè)限
                3.2.3 檢測(cè)結(jié)果
            3.3 生菜內(nèi)生細(xì)菌菌種鑒定和耐藥性
                3.3.1 內(nèi)生細(xì)菌計(jì)數(shù)
                3.3.2 菌種鑒定
                3.3.3 藥敏試驗(yàn)
                3.3.4 耐藥性細(xì)菌的PMQR基因擴(kuò)增
        4 討論
參考文獻(xiàn)
創(chuàng)新和不足之處
致謝
附件



本文編號(hào)：3956208