大腸桿菌 Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917;EcN)是德國醫(yī)生 Alfred Nissle 于1917年在腹瀉流行疫區(qū)一名抗腹瀉士兵腸道糞便中首次分離出的一株益生菌,由于腸道內(nèi)存在該株“強大效能且具有拮抗活性”的大腸桿菌,該士兵免受腸道傳染病流行區(qū)腹瀉的侵擾。大腸桿菌Nissle1917是一株無致病性的益生菌,能賦予不同宿主健康益處,且至今并未發(fā)現(xiàn)對宿主有已知的害處和不利影響。在德國和其他一些歐洲國家,EcN作為醫(yī)用Mutaflor(?)的活性成分,在治療各種腸道疾病中扮演著重要角色。近年來臨床應(yīng)用上,益生菌Nissle1917菌株作為疾病診治載體被加以改造的報道越來越多,該益生菌已用于疫苗、腫瘤治療、保健品和診斷制劑等多方面產(chǎn)品的開發(fā)與研制。EcNc(EcN cured of its two cryptic plasmids pMUT1 andpMUT2;EcNc)克隆株為大腸桿菌Nissle1917原型野生株改造后去除其胞內(nèi)兩個隱秘性質(zhì)粒pMUT1和pMUT2,具有比原型親本株能夠攜帶更多(大)容量的同源或外源基因的特性,該菌株已在本...

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圖２．１提高細菌染色體中異源基因表達水平的策略

???—?圖２．１提高細菌染色體中異源基因表達水平的策略。（１）增加整合到染色體中的目標異源基因的拷貝數(shù)；（２）??選擇染色體中高轉(zhuǎn)錄水平的位點以整合異源基因；（３）優(yōu)化靶基因的表迗盒，（Ａ）增加啟動子的強度以控制蛋??白質(zhì)表達，（Ｂ）使用增強子或激活子增加靶基因的轉(zhuǎn)錄水平，（Ｃ....

圖３．１．質(zhì)粒提取電泳鑒定圖??Ｆｉｇ３．１．?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｐｒｏｆｉｌｅｓ?ｏｆ?ｐＩＮＴ－ｔｓ??

３．１．質(zhì)粒提取電泳鑒定ｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｐｒｏ化感受態(tài)細胞，具體３７°Ｃ振蕩培養(yǎng)過夜；培養(yǎng)至細菌ＯＤ６〇〇ｎｍ預(yù)冷的１０％甘油重后預(yù)冷的１０％甘油重：預(yù)冷的１０％甘油體的ＥｃＮ感受態(tài)細胞?２５?）ｉＦ，?電阻?２００?□?／ｍｉｎ?，?３０°Ｃ培養(yǎng)１?ｈ....

圖３．２．她基因整合入Ｎｉｓｓ丨ｅｌ９１７基因組原理示意圖??Ｆｉｇ３．２．?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｆｏｒ?ｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ＾；?ｇｅｎｅ?ｉｎｔｏ?ｔｈｅ?ｇｅｎｏｍｅ?

?｜??２３２２?＾ＱＨ｜??２Ｄ２？??圖３．１．質(zhì)粒提取電泳鑒定圖??Ｆｉｇ３．１．?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｐｒｏｆｉｌｅｓ?ｏｆ?ｐＩＮＴ－ｔｓ??制備大腸桿菌Ｎｉｓｓｌｅ?１９１７電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞，具體方法如下：從ＬＢ平板上挑�。牛悖螁�?....

圖3.3.g左，若因整合入Nissle1917墓因組的試臉流程圖

３．?１．５?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?和?Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ??參照文獻［７］，過夜培養(yǎng)５２５／ｐ６３ＧＦＰ，?５２５?（陰性對照）和５２５／ｐＧＦＰｍｕｔ３．１?（陽性對照），??將過夜培養(yǎng)的菌液重新轉(zhuǎn)接于５?ｍＬ新鮮ＬＢ中，待ＯＤ６（Ｍ）ｎｍ約為１．０時，各細菌皆調(diào)整?....

本文編號：4004769