免疫系統(tǒng)是生物體抵抗外來(lái)微生物入侵的第一道防線,干擾素是免疫應(yīng)答過(guò)程中的重要效應(yīng)因子。Interferon-γ(IFN-y)屬于Ⅱ型干擾素,主要由活化的T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞產(chǎn)生,在天然免疫和獲得性免疫中發(fā)揮重要作用,特別是對(duì)胞內(nèi)寄生菌的感染具有顯著抑制效果。microRNA(miRNA)是一類廣泛存在于生物體內(nèi)且長(zhǎng)度在18-25bp之間的非編碼RNA。近十年來(lái),大量研究表明miRNA參與對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的調(diào)控,對(duì)維持機(jī)體的免疫穩(wěn)態(tài)起著舉足輕重的作用。本研究選取重要的免疫細(xì)胞因子IFN-y作為研究對(duì)象,利用生物信息學(xué)方法和生物學(xué)實(shí)驗(yàn),對(duì)可能參與調(diào)控IFN-y表達(dá)的miRNA進(jìn)行了篩選和驗(yàn)證,希望通過(guò)本研究能夠系統(tǒng)闡述miRNA對(duì)IFN-y表達(dá)多層次的調(diào)控機(jī)制,加深對(duì)miRNA調(diào)控IFN-y介導(dǎo)的免疫應(yīng)答過(guò)程中作用機(jī)制的認(rèn)識(shí),同時(shí)為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)miRNA作為疾病診斷和治療的新靶標(biāo)提供理論依據(jù)。具體研究?jī)?nèi)容包括以下幾個(gè)方面： 1.靶向IFN-y啟動(dòng)子及其3’UTR的miRNA的預(yù)測(cè) 利用在線miRNA預(yù)測(cè)軟件Microinspector和TargetScan分別對(duì)IFN-y轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游的11...

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 干擾素
        1.1.1 IF-N-γ的產(chǎn)生
        1.1.2 IFN-γ的分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能
        1.1.3 IFN-γ的應(yīng)用及發(fā)展前景
    1.2 microRNA
        1.2.1 microRNA的生成
        1.2.2 microRNA的作用方式
        1.2.3 microRNA的表達(dá)調(diào)控
        1.2.4 microRNA的研究方法
        1.2.5 microRNA的應(yīng)用前景
第2章 目的與意義
第3章 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 細(xì)胞系以及轉(zhuǎn)染相關(guān)材料
        3.1.3 載體構(gòu)建所用材料及獲贈(zèng)載體
        3.1.4 培養(yǎng)基及其配制
        3.1.5 分子生物學(xué)分析軟件
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.2 靶點(diǎn)突變報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.3 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)
        3.2.4 miRNA mimics、inhibitors及超表達(dá)質(zhì)粒的電轉(zhuǎn)
        3.2.5 Real-Time PCR檢測(cè)IFN-γmRNA表達(dá)水平
        3.2.6 ELISA檢測(cè)IFN-γ蛋白表達(dá)水平
        3.2.7 熒光定量qRT-PCR檢測(cè)miRNA表達(dá)差異
        3.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第4章 結(jié)果與分析
    4.1 IFN-γ啟動(dòng)子及3’UTR報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.1.1 IFN-γ啟動(dòng)子報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.1.2 IFN-γ 3’UTR報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建
    4.2 靶向IFN-γ啟動(dòng)子及靶向其3’UTR的miRNA預(yù)測(cè)
    4.3 靶向IFN-γ啟動(dòng)子的miRNA篩選
        4.3.1 IFN-γ轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游1197bp片段啟動(dòng)子活性的驗(yàn)證
        4.3.2 靶向IFN-γ啟動(dòng)子的miRNA的初步篩選
        4.3.3 miR-27a抑制IFN-γ啟動(dòng)子活性的驗(yàn)證
        4.3.4 miR-27a與IFN-γ啟動(dòng)子作用靶點(diǎn)的驗(yàn)證
    4.4 靶向IFN-γ3’UTR的miRNA篩選
        4.4.1 靶向IFN-γ3’UTR的miRNA的初步篩選
        4.4.2 miR-27a結(jié)合IFN-γ3’UTR的驗(yàn)證
        4.4.3 miR-27a與IFN-γ3’UTR作用靶點(diǎn)的驗(yàn)證
    4.5 T細(xì)胞中miR-27a對(duì)IFN-γ表達(dá)的調(diào)控作用
        4.5.1 EL4細(xì)胞電轉(zhuǎn)條件的優(yōu)化
        4.5.2 EL4細(xì)胞中IFN-γ表達(dá)的檢測(cè)
        4.5.3 EL4細(xì)胞中miR-27a對(duì)IFN-γ表達(dá)的調(diào)控作用
        4.5.4 EL4細(xì)胞中T-bet表達(dá)質(zhì)粒表達(dá)效率的檢測(cè)
    4.6 EL4細(xì)胞中IFN-γ的表達(dá)對(duì)miR-27a表達(dá)的影響
第5章 討論與結(jié)論
    5.1 討論
        5.1.1 靶向IFN-γ啟動(dòng)子及靶向其3’UTR的miRNA的預(yù)測(cè)
        5.1.2 靶向IFN-γ啟動(dòng)子及靶向其3’UTR的miRNA的篩選與驗(yàn)證
        5.1.3 miR-27a抑制IFN-γ表達(dá)
        5.1.4 表達(dá)量增加的IFN-γ對(duì)miR-27a表達(dá)的影響
    5.2 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3910703