免疫系統(tǒng)是生物體抵抗外來微生物入侵的第一道防線,干擾素是免疫應答過程中的重要效應因子。Interferon-γ(IFN-y)屬于Ⅱ型干擾素,主要由活化的T淋巴細胞、NK細胞產(chǎn)生,在天然免疫和獲得性免疫中發(fā)揮重要作用,特別是對胞內(nèi)寄生菌的感染具有顯著抑制效果。microRNA(miRNA)是一類廣泛存在于生物體內(nèi)且長度在18-25bp之間的非編碼RNA。近十年來,大量研究表明miRNA參與對機體免疫系統(tǒng)的調(diào)控,對維持機體的免疫穩(wěn)態(tài)起著舉足輕重的作用。本研究選取重要的免疫細胞因子IFN-y作為研究對象,利用生物信息學方法和生物學實驗,對可能參與調(diào)控IFN-y表達的miRNA進行了篩選和驗證,希望通過本研究能夠系統(tǒng)闡述miRNA對IFN-y表達多層次的調(diào)控機制,加深對miRNA調(diào)控IFN-y介導的免疫應答過程中作用機制的認識,同時為進一步開發(fā)miRNA作為疾病診斷和治療的新靶標提供理論依據(jù)。具體研究內(nèi)容包括以下幾個方面： 1.靶向IFN-y啟動子及其3’UTR的miRNA的預測 利用在線miRNA預測軟件Microinspector和TargetScan分別對IFN-y轉(zhuǎn)錄起始位點上游的11...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
第1章 文獻綜述
    1.1 干擾素
        1.1.1 IF-N-γ的產(chǎn)生
        1.1.2 IFN-γ的分子結(jié)構(gòu)與生物學功能
        1.1.3 IFN-γ的應用及發(fā)展前景
    1.2 microRNA
        1.2.1 microRNA的生成
        1.2.2 microRNA的作用方式
        1.2.3 microRNA的表達調(diào)控
        1.2.4 microRNA的研究方法
        1.2.5 microRNA的應用前景
第2章 目的與意義
第3章 材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 細胞系以及轉(zhuǎn)染相關(guān)材料
        3.1.3 載體構(gòu)建所用材料及獲贈載體
        3.1.4 培養(yǎng)基及其配制
        3.1.5 分子生物學分析軟件
    3.2 實驗方法
        3.2.1 質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.2 靶點突變報告質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.3 雙熒光素酶報告系統(tǒng)
        3.2.4 miRNA mimics、inhibitors及超表達質(zhì)粒的電轉(zhuǎn)
        3.2.5 Real-Time PCR檢測IFN-γmRNA表達水平
        3.2.6 ELISA檢測IFN-γ蛋白表達水平
        3.2.7 熒光定量qRT-PCR檢測miRNA表達差異
        3.2.8 統(tǒng)計學方法
第4章 結(jié)果與分析
    4.1 IFN-γ啟動子及3’UTR報告質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.1.1 IFN-γ啟動子報告質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.1.2 IFN-γ 3’UTR報告質(zhì)粒的構(gòu)建
    4.2 靶向IFN-γ啟動子及靶向其3’UTR的miRNA預測
    4.3 靶向IFN-γ啟動子的miRNA篩選
        4.3.1 IFN-γ轉(zhuǎn)錄起始位點上游1197bp片段啟動子活性的驗證
        4.3.2 靶向IFN-γ啟動子的miRNA的初步篩選
        4.3.3 miR-27a抑制IFN-γ啟動子活性的驗證
        4.3.4 miR-27a與IFN-γ啟動子作用靶點的驗證
    4.4 靶向IFN-γ3’UTR的miRNA篩選
        4.4.1 靶向IFN-γ3’UTR的miRNA的初步篩選
        4.4.2 miR-27a結(jié)合IFN-γ3’UTR的驗證
        4.4.3 miR-27a與IFN-γ3’UTR作用靶點的驗證
    4.5 T細胞中miR-27a對IFN-γ表達的調(diào)控作用
        4.5.1 EL4細胞電轉(zhuǎn)條件的優(yōu)化
        4.5.2 EL4細胞中IFN-γ表達的檢測
        4.5.3 EL4細胞中miR-27a對IFN-γ表達的調(diào)控作用
        4.5.4 EL4細胞中T-bet表達質(zhì)粒表達效率的檢測
    4.6 EL4細胞中IFN-γ的表達對miR-27a表達的影響
第5章 討論與結(jié)論
    5.1 討論
        5.1.1 靶向IFN-γ啟動子及靶向其3’UTR的miRNA的預測
        5.1.2 靶向IFN-γ啟動子及靶向其3’UTR的miRNA的篩選與驗證
        5.1.3 miR-27a抑制IFN-γ表達
        5.1.4 表達量增加的IFN-γ對miR-27a表達的影響
    5.2 結(jié)論
參考文獻
致謝



本文編號：3910703