發(fā)布時間：2023-05-18 03:57

　　牛傳染性鼻氣管炎病毒(Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus,IBRV)又稱牛皰疹病毒I型(Bovine herpesvirus type 1,BHV-1),它會引起一種急性、熱性、接觸性傳染病,在感染牛之后,主要表現(xiàn)出高熱、呼吸困難、鼻炎、竇炎和上呼吸道炎癥,稱為牛傳染性鼻氣管炎(Infectious Bovine Rhinotracheitis,IBR),又稱“紅鼻病”或“壞死性鼻炎”[1]。世界動物衛(wèi)生組織(World Organisation for Animal Health,OIE)將IBR列為法定報告動物疫病。gD蛋白是IBRV的主要結(jié)構(gòu)蛋白,它可以同時誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫,gD也是病毒復(fù)制的必需基因,在病毒吸附和侵入宿主細(xì)胞過程中起重要作用,gD還是刺激機體產(chǎn)生中和抗體的主要糖蛋白。因此,在IBR的所有蛋白中g(shù)D被作為IBRV特異性抗原研究的首選。本研究以本實驗室于2017年從呼市周邊牧場分離到的IBRV為基礎(chǔ),對其進行鑒定,并命名為IBRVNMHS-1。并以IBRVNMHS-1基因組為模板,設(shè)計引物特異性擴增gD基因,與表達載...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 牛傳染性鼻氣管炎的流行情況
        1.1.1 病原學(xué)
        1.1.2 流行病學(xué)
        1.1.3 臨床癥狀和病理變化
    1.2 牛傳染性鼻氣管炎病毒的致病性
        1.2.1 免疫抑制
        1.2.2 病毒相關(guān)蛋白
    1.3 牛傳染性鼻氣管炎的診斷
        1.3.1 臨床診斷
        1.3.2 病原學(xué)診斷
        1.3.3 血清學(xué)檢測
    1.4 牛傳染性鼻氣管炎疫苗研究進展
        1.4.1 傳統(tǒng)疫苗
        1.4.2 亞單位疫苗
        1.4.3 基因工程疫苗
        1.4.4 DNA疫苗
    1.5 選題的目的和意義
2 IBRV NMHS-1株的分離鑒定
    2.1 試驗材料
        2.1.1 病料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 病料的采集
        2.2.2 病毒的分離與培養(yǎng)
        2.2.3 蝕斑克隆純化病毒
        2.2.4 病毒滴度測定
        2.2.5 中和試驗
        2.2.6 間接免疫熒光鑒定
        2.2.7 PCR鑒定
    2.3 試驗結(jié)果
        2.3.1 病毒的分離培養(yǎng)結(jié)果
        2.3.2 病毒滴度的測定結(jié)果
        2.3.3 中和試驗結(jié)果
        2.3.4 間接免疫熒光試驗鑒定結(jié)果
        2.3.5 PCR鑒定結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3 IBRV gD蛋白的原核表達
    3.1 試驗材料
        3.1.1 菌(毒)株及質(zhì)粒
        3.1.2 主要儀器設(shè)備
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要溶液及培養(yǎng)基
    3.2 試驗方法
        3.2.1 病毒基因組的提取
        3.2.2 引物的設(shè)計合成
        3.2.3 目的基因的PCR擴增
        3.2.4 膠回收目的片段
        3.2.5 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.6 重組質(zhì)粒的鑒定
        3.2.7 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達宿主菌
        3.2.8 重組蛋白的誘導(dǎo)表達
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 gD基因PCR結(jié)果
        3.3.2 重組質(zhì)粒pET-32a-gD鑒定結(jié)果
        3.3.3 重組蛋白的可溶性鑒定
        3.3.4 重組蛋白的最佳誘導(dǎo)條件
        3.3.5 重組蛋白的蛋白定量
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 IBRV家兔模型的建立
    4.1 試驗材料
        4.1.1 病毒及實驗動物
        4.1.2 主要儀器設(shè)備
    4.2 試驗方法
        4.2.1 病毒的純化濃縮
        4.2.2 病毒感染家兔
        4.2.3 病毒分離
        4.2.4 間接細(xì)胞免疫熒光
        4.2.5 PCR檢測
        4.2.6 病理組織學(xué)觀察
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 臨床癥狀
        4.3.2 病毒分離結(jié)果
        4.3.3 間接免疫熒光結(jié)果
        4.3.4 PCR檢測結(jié)果
        4.3.5 病理組織學(xué)變化
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
5 gD蛋白的免疫學(xué)特性研究
    5.1 試驗材料
        5.1.1 病毒及實驗動物
        5.1.2 主要試劑
    5.2 試驗方法
        5.2.1 Western blot檢測
        5.2.2 gD蛋白亞單位疫苗的初步研究
    5.3 試驗結(jié)果
        5.3.1 Western blot檢測結(jié)果
        5.3.2 gD亞單位疫苗免疫試驗結(jié)果
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
6 全文結(jié)論
致謝
參考文獻
作者簡介



本文編號：3818626