絲狀支原體絲狀亞種(Mycoplasma mycoides subsp. Mycoides Small Colony,Mmm)是牛傳染性胸膜肺炎(contagious bovine pleuropneumonia, CBPP)的病原。CBPP是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織規(guī)定的需報(bào)告?zhèn)魅静?目前,該病在非洲很多國(guó)家仍是一種重要的動(dòng)物傳染病。中國(guó)利用Mmm中國(guó)分離株Ben-1在兔或綿羊體內(nèi)連續(xù)傳代研制成“兔化綿羊化弱毒疫苗”并成功控制了CBPP的流行,于2011年5月被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織宣布為無牛肺疫國(guó)家,但目前Mmm傳代致弱的機(jī)制仍不明確。 本研究小組結(jié)合下一代測(cè)序技術(shù)以及比較基因組學(xué),對(duì)Mmm中國(guó)分離株強(qiáng)毒株Ben-1以及致弱毒株Ben-470進(jìn)行全基因組測(cè)序及序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)Ben-1和Ben-470之間存在30kb的基因缺失,從而推測(cè)這些基因的缺失可能與Ben-1菌株的毒力減弱相關(guān)。 在Ben-1和Ben-470基因組之間缺失的30kb片段中,我們選取其中的一個(gè)差異基因p19進(jìn)行研究。本研究利用PCR、RT-PCR以及Dot blot雜交對(duì)p19基因在Ben-1和Ben-470全基因組中的差異情...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 絲狀支原體絲狀亞種(Mmm)概述
    1.2 牛傳染性胸膜肺炎(CBPP)概述
        1.2.1 牛傳染性胸膜肺炎概述
        1.2.2 牛傳染性胸膜肺炎的流行病學(xué)
        1.2.3 中國(guó)弱毒CBPP疫苗的研制
        1.2.4 綿羊、藏綿羊化疫苗的發(fā)展和應(yīng)用
    1.3 絲狀支原體絲狀亞種的致病分子機(jī)制
        1.3.1 絲狀支原體絲狀亞種的致病分子機(jī)制概述
        1.3.2 絲狀支原體絲狀亞種的免疫原性
        1.3.3 分泌型多糖以及莢膜多糖
        1.3.4 表面蛋白
        1.3.5 粘附因子
        1.3.6 表面可變蛋白
        1.3.7 毒素代謝通路產(chǎn)物
        1.3.8 細(xì)菌毒力的分解代謝物阻礙作用
    1.4 本研究的目的和意義
第二章 P19的序列分析及原核表達(dá)
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要設(shè)備儀器
        2.1.4 主要溶液及配置
    2.2 方法
        2.2.1 P19及其基因的序列分析
        2.2.2 Mmm基因組DNA的提取以及cDNA的制備
        2.2.3 p19基因的克隆
        2.2.4 p19基因的Dot blot雜交
        2.2.5 pET28a-p19重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        2.2.6 重組質(zhì)粒pET-28a-p19的表達(dá)
        2.2.7 rP19可溶性判斷
        2.2.8 rP19的純化
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 P19及其基因的序列分析
        2.3.2 p19基因克隆與分析
        2.3.3 p19基因的Dot blot雜交
        2.3.4 pET-28a-p19重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        2.3.5 rP19的原核表達(dá)與純化
    2.4 小結(jié)
    2.5 討論
第三章 P19多克隆抗體制備及亞細(xì)胞定位
    3.1 材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        3.1.3 相關(guān)溶液及配制方法
    3.2 方法
        3.2.1 兔抗rP19多克隆抗體的制備
        3.2.2 兔抗rP19血清效價(jià)的測(cè)定
        3.2.3 Mmm的細(xì)胞總蛋白、膜蛋白及胞漿蛋白組分的提取
        3.2.4 Mmm P19的細(xì)胞定位
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 兔抗rP19血清效價(jià)的測(cè)定
        3.3.2 Mmm P19的細(xì)胞定位
    3.4 小結(jié)
    3.5 討論
第四章 P19對(duì)宿主細(xì)胞粘附特性及免疫功能的研究
    4.1 材料
        4.1.1 菌株與細(xì)胞
        4.1.2 試劑
        4.1.3 血清
        4.1.4 主要儀器
    4.2 方法
        4.2.1 rP19粘附EBL細(xì)胞
        4.2.2 夾心ELISA實(shí)驗(yàn)
        4.2.3 rP19的Western Blot檢測(cè)
        4.2.4 rP19的ELISA檢測(cè)
        4.2.5 P19刺激EBL細(xì)胞
        4.2.6 SYBR Green I實(shí)時(shí)定量PCR
        4.2.7 相對(duì)mRNA表達(dá)水平的計(jì)算
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 rP19粘附EBL細(xì)胞
        4.3.2 夾心ELISA實(shí)驗(yàn)
        4.3.3 rP19的Western Blot檢測(cè)
        4.3.4 rP19的ELISA檢測(cè)
        4.3.5 rP19激活EBL細(xì)胞IL-1β和TNF-α的mRNA上調(diào)表達(dá)
    4.4 結(jié)論
    4.5 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3818594