口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus, FMDV)引起牛、羊、豬等偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。FMDV屬于微RNA病毒科、口蹄疫病毒屬成員。微RNA病毒科病毒的基因組5’末端缺乏帽子結構,其蛋白合成起始依賴于5’非編碼區(qū)內(nèi)的翻譯順式作用元件一內(nèi)部核糖體進入位點(Internal ribosome entry site, IRES),它能夠招募翻譯起始因子及核糖體從而起始翻譯。最近的研究發(fā)現(xiàn),不同病毒的IRES在不同細胞中的翻譯起始效率不同,這表明IRES可能是決定病毒細胞嗜性的重要元件。 為確定IRES元件是否與口蹄疫病毒的細胞嗜性有關,我們在O型FMDV反向遺傳操作平臺基礎上,利用與FMDV IRES親緣關系最近的牛鼻病毒(BRV) IRES進行置換,構建并拯救了嵌合BRV IRES的重組FMDV。該嵌合病毒在鼠源細胞BHK-21上具有與親本毒相同的復制能力,然而在豬源細胞IBRS-2和PK-15上的復制能力卻比親本病毒下降100倍。這一發(fā)現(xiàn)表明,IRES是決定FMDV細...

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圖1.1口蹄疫病毒基因組結構（引自Masonetal.2003)

nonstructuralproteins圖1.1口蹄疫病毒基因組結構（引自Masonetal.2003)Fig1.1SchematicdiagramoftheFMDVgenome(RetrievedfromMasonetal.2003)FMDV....

圖2.1FMDV亞基因組復制子RepFMDV構建結構示意圖

圖2.1FMDV亞基因組復制子RepFMDV構建結構示意圖Fig.2.1SchematicdiagramofconstructionofthesubgenomicrepliconofFMDV2.1.6轉染

圖2.2RepFMDV的醒切鑒定

U:DL10000;1:PYS;2:RepFMDV圖2.2RepFMDV的醒切鑒定IdentificationoftheRepFMDVbyrestrictionenzymea制能力RepFMDV轉染BHK-2]后24h提取的細胞總所示。以上游或下游引物....

圖2.3RepFMDV轉染BHK-21細胞中負鏈RNA的RT-PCR檢測

M1 2loooobp7000bp4ooobplooobpU:DL10000;1:PYS;2:RepFMDV圖2.2RepFMDV的醒切鑒定Fig.2.2IdentificationoftheRepFMDVbyrestrictionenzymeana....

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