乳腺炎是奶山羊常見的疾病，是由細(xì)菌或真菌等病原微生物感染乳腺組織引起的炎癥反應(yīng)，不但影響了產(chǎn)奶量和奶質(zhì)量，而且嚴(yán)重影響了山羊的健康。為了檢測乳腺炎過程中哪些細(xì)胞因子有較高水平的表達(dá)，本研究分別用熱滅活的金黃色葡萄球菌、停乳鏈球菌和大腸桿菌分別對薩能奶山羊乳腺上皮細(xì)胞刺激0、2、4、6和8h，然后檢測LF、TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-8、TLR2、TLR4及BD-3這8組基因的mRNA水平變化。結(jié)果顯示，大腸桿菌刺激6h后，LF、IL-1α、IL-1β和TLR2的表達(dá)量顯著升高（P<0.05）；金黃色葡萄球菌刺激6h后，TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-8、TLR2和TLR4的表達(dá)量顯著升高（P<0.05）；停乳鏈球菌刺激6h后，TNF-α、IL-1α、IL-1β和TLR2的表達(dá)量顯著升高（P<0.05）。綜合以上結(jié)果，在大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和停乳鏈球菌的刺激下IL-1α、IL-1β和TLR2三種因子都有較高水平的表達(dá)，為乳腺炎的抗炎機(jī)理研究奠定了基礎(chǔ)。 在抗乳腺炎的機(jī)理研究中，細(xì)菌誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建具有重要的意義，為了確定當(dāng)細(xì)菌侵染山羊乳腺上...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
綜述
    第一章 山羊乳腺炎的研究概況
        1.1 乳腺炎的分類
        1.2 乳腺炎的癥狀及診斷
        1.3 乳腺炎的危害
        1.4 山羊乳腺炎的主要病因
            1.4.1 致病性微生物的感染
            1.4.2 環(huán)境污染
        1.5 山羊乳腺炎的預(yù)防與治療
            1.5.1 提高擠奶過程環(huán)境衛(wèi)生
            1.5.2 提高擠奶技術(shù)
            1.5.3 提高乳腺的自然抗病能力
            1.5.4 乳腺炎疫苗的使用
            1.5.5 中西藥的使用
            1.5.6 抗乳腺炎新品種的遺傳育種
        1.6 小結(jié)
    第二章 抗乳腺炎基因的研究進(jìn)展
        2.1 乳腺炎的致病機(jī)理
        2.2 抗乳腺炎的基因
            2.2.1 乳鐵蛋白
            2.2.2 白細(xì)胞介素
            2.2.3 腫瘤壞死因子
            2.2.4 Toll 樣受體
            2.2.5 防御素
        2.3 β-防御素基因的研究進(jìn)展
        2.4 抗乳腺炎基因的研究進(jìn)展
        2.5 小結(jié)
實(shí)驗(yàn)
    第三章 山羊乳腺上皮細(xì)胞細(xì)菌誘導(dǎo)型基因的篩選
        3.1 材料
            3.1.1 組織
            3.1.2 菌株和質(zhì)粒
            3.1.3 主要試劑
            3.1.4 主要儀器設(shè)備
        3.2 方法
            3.2.1 薩能奶山羊乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)
            3.2.2 乳腺上皮細(xì)胞攻菌前后 8 組因子的 mRNA 差異表達(dá)檢測
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 乳腺上皮細(xì)胞攻菌前后 8 組基因的 mRNA 定量表達(dá)檢測結(jié)果
            3.3.2 乳腺上皮細(xì)胞攻菌前后 3 組基因的 western blot 結(jié)果
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 IL-1α、IL-1β和 TLR2 基因的啟動子分析
        4.1 材料
            4.1.1 血液和細(xì)胞
            4.1.2 菌株和質(zhì)粒
            4.1.3 主要試劑
            4.1.4 主要儀器設(shè)備
        4.2 方法
            4.2.1 山羊基因組 DNA 提取
            4.2.2 三個基因啟動子區(qū)的擴(kuò)增及啟動子-EGFP-慢病毒載體構(gòu)建
            4.2.3 293T 細(xì)胞的準(zhǔn)備與轉(zhuǎn)染
            4.2.4 慢病毒載體在乳腺上皮細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染及效率鑒定
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 啟動子-EGFP-慢病毒載體構(gòu)建
            4.3.2 293T 細(xì)胞中 EGFP 蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
            4.3.3 乳腺上皮細(xì)胞中 EGFP 蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第五章 薩能奶山羊β-防御素-3 基因的克隆和序列分析
        5.1 材料
            5.1.1 菌株和質(zhì)粒
            5.1.2 主要試劑
            5.1.3 主要儀器設(shè)備
        5.2 方法
            5.2.1 引物的設(shè)計與合成
            5.2.2 細(xì)胞總 RNA 的提取和 cDNA 的反轉(zhuǎn)錄合成
            5.2.3 目的基因的克隆與測序
        5.3 結(jié)果
            5.3.1 薩能奶山羊 BD-3 基因 RT-PCR 擴(kuò)增結(jié)果
            5.3.2 薩能奶山羊 BD-3 基因序列的測定與分析
            5.3.3 蛋白結(jié)構(gòu)和功能預(yù)測
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
全文結(jié)論
創(chuàng)新之處和進(jìn)一步的研究課題
    創(chuàng)新之處
    進(jìn)一步的研究課題
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號：3812285