腸出血性大腸桿菌(Enterohaemorrhagic Escherichia coli, EHEC) O157:H7屬于腸桿菌科埃希氏菌屬,能引起人類的腹瀉、出血性結(jié)腸炎(Hemorrhagic colitis, HC)、溶血性尿毒綜合癥(Hemolyticuremic syndrome, HUS)及血栓性血小板減少性紫癜(Thrombotic Thrombocytopenicpurpura, TTP)等嚴(yán)重疾病,可在動(dòng)物腸道內(nèi)長(zhǎng)期寄居,對(duì)人類的健康及畜牧業(yè)危害巨大。其感染流行已經(jīng)成為全球性的公共衛(wèi)生問(wèn)題。對(duì)于該病的防范不可懈怠,所以建立一種快速、準(zhǔn)確、便捷的診斷檢測(cè)方法十分必要。 H7蛋白為EHEC O157:H7的鞭毛蛋白,決定著大腸桿菌的血清型。有關(guān)研究表明,EHEC O157:H7與結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞或者黏液結(jié)合的過(guò)程發(fā)生在菌體在動(dòng)物體內(nèi)定植的早期,而鞭毛在這期間起著物理性的連接點(diǎn)的作用。而其在誘導(dǎo)產(chǎn)生天然的免疫反應(yīng)的同時(shí)可產(chǎn)生前炎癥因子,并且可以誘導(dǎo)產(chǎn)生抗原特異性的免疫反應(yīng)。所以,H7鞭毛全長(zhǎng)蛋白在制備特異性的檢測(cè)抗體時(shí)是不可或缺的免疫原。在國(guó)內(nèi)外之前的研究中用類似免疫方法制...

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號(hào)說(shuō)明
文獻(xiàn)綜述
    1 病原學(xué)
    2 流行病學(xué)
        2.1 傳染源
        2.2 傳播途徑
        2.3 易感人群
    3 主要毒力因子及致病作用
        3.1 志賀毒素
        3.2 pO157質(zhì)粒
        3.3 LEE致病島
            3.3.1 Eae基因
            3.3.2 Tir基因
            3.3.3 編碼Ⅲ型分泌系統(tǒng)(esc或sep)及其分泌蛋白(esp)的基因
    4 致病機(jī)理及臨床特征
        4.1 致病機(jī)理
        4.2 臨床特征
    5 檢測(cè)方法
        5.1 細(xì)菌分離法檢測(cè)
        5.2 免疫學(xué)檢測(cè)方法
            5.2.1 免疫磁珠法
            5.2.2 免疫熒光法
            5.2.3 凝集試驗(yàn)法
            5.2.4 膠體金免疫檢測(cè)技術(shù)
        5.3 分子生物學(xué)檢測(cè)方法
            5.3.1 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)
            5.3.2 基因芯片技術(shù)
            5.3.3 生物傳感技術(shù)
    6 防治
    7 實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙饬x
研究一 大腸桿菌O157：H7鞭毛蛋白的原核表達(dá)
    摘要
    1 材料
        1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.2 工具酶與試劑
        1.3 培養(yǎng)基及常用溶液
        1.4 主要儀器
    2 方法
        2.1 EHEC O157：H7鞭毛flic基因的擴(kuò)增
        2.2 pMD18-T-Flic質(zhì)粒的構(gòu)建及篩選
        2.3 pET-28a-Flic質(zhì)粒的構(gòu)建及篩選
        2.4 His-Flic-H7融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及SDS-PAGE分析
        2.5 融合蛋白His-Flic-H7的大量表達(dá)及純化
        2.6 融合蛋白His-Flic-H7的Western-blot分析
    3 結(jié)果
        3.1 Flic基因的擴(kuò)增
        3.2 pMD18-T-Flic重組質(zhì)粒的鑒定
        3.3 重組質(zhì)粒pET-28a-Flic的鑒定
        3.4 His-Flic-H7融合蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的SDS-PAGE分析
        3.5 His-Flic-H7融合蛋白的大量誘導(dǎo)及純化
        3.6 His-Flic-H7融合蛋白的Western-blot
    4 討論
研究二 大腸桿菌O157：H7鞭毛蛋白的單克隆抗體制備
    摘要
    1 材料
        1.1 細(xì)胞和抗原
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器
        1.5 主要培養(yǎng)基
    2 方法
        2.1 小鼠的免疫
        2.2 細(xì)胞融合
        2.3 陽(yáng)性克隆的篩選
        2.4 雜交瘤細(xì)胞的亞克隆
        2.5 腹水的制備
        2.6 單克隆抗體的亞類鑒定
        2.7 單克隆抗體的特異性檢測(cè)
        2.8 單克隆抗體效價(jià)的檢測(cè)
    3 結(jié)果
        3.1 血清及包被抗原的工作濃度的確定
        3.2 雜交瘤細(xì)胞的篩選及亞克隆
        3.3 單克隆抗體亞類的鑒定
        3.4 單克隆抗體的特異性檢測(cè)
        3.5 抗體效價(jià)的檢測(cè)
    4 討論
參考文獻(xiàn)
研究結(jié)論
致謝



本文編號(hào)：3812228