本文選題：角蛋白 + 黑色素生成��； 參考：《中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)》2017年03期

【摘要】：基因表達(dá)譜顯示,綿羊角蛋白2(keratin2,Krt2)的mRNA在不同毛色皮膚的表達(dá)不同,暗示Krt2基因可能對(duì)皮膚黑色素生成有一定的影響。為探索角蛋白2對(duì)體外培養(yǎng)的羊駝皮膚黑色素細(xì)胞黑色素生成的影響,首先采用PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序,結(jié)合DNAMAN軟件比對(duì)分析發(fā)現(xiàn),羊駝Krt2編碼序列(c DNA)與NCBI公布的人KRT2高度同源(91%);將人KRT2添加于培養(yǎng)的羊駝皮膚黑色素細(xì)胞,觀(guān)察人KRT2對(duì)羊駝皮膚黑色素細(xì)胞黑色素的生成作用。免疫組織化學(xué)顯示,外源性的人KRT2處理羊駝皮膚黑色素細(xì)胞72 h后,黑色素細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中Krt2表達(dá)增強(qiáng)。實(shí)時(shí)定量PCR及Western印跡實(shí)驗(yàn)揭示,與胎牛血清清蛋白處理的羊駝皮膚黑色素細(xì)胞比較,1 ng/m L、10 ng/m L和100 ng/m L人KTR2處理的羊駝皮膚黑色素細(xì)胞酪氨酸酶(Tyr)、酪氨酸相關(guān)蛋白-1(Tyrp1)、小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(Mitf)基因表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05);尤其在添加10 ng/m L KTR2的細(xì)胞中,3個(gè)基因的mRNA相對(duì)表達(dá)水平升高尤其顯著,分別是對(duì)照細(xì)胞的4倍、10倍和12.9倍(P0.01),蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)水平分別是對(duì)照細(xì)胞的2倍、2.1倍和1.7倍(P0.01)。分光光度法測(cè)量A490結(jié)果證明,1 ng/m L、10 ng/m L和100 ng/m L人KTR2處理的羊駝皮膚黑色素細(xì)胞產(chǎn)生的黑色素含量分別是對(duì)照細(xì)胞的1.3倍(P0.05)、1.8倍(P0.01)和1.5倍(P0.05)。上述結(jié)果說(shuō)明,人KTR2處理可通過(guò)刺激羊駝皮膚黑色素細(xì)胞黑色素合成相關(guān)信號(hào)通路,促進(jìn)黑色素的合成。
[Abstract]:Gene expression profiles showed that the mRNA expression of keratin2 (keratin2) was different in different skin, suggesting that Krt2 gene might have an effect on melanin production. In order to explore the effect of keratin 2 on melanin production in the skin of alpaca in vitro, the PCR amplification products were sequenced and the results were compared with DNA man software. Human KRT2 coding sequence (c DNA) was highly homologous to human KRT2 published by NCBI (91%), and human KRT2 was added to cultured melanocytes of alpaca skin to observe the effect of human KRT2 on melanin production in alpaca skin. Immunohistochemistry showed that the expression of Krt2 in the cytoplasm of melanocytes increased after 72 h treatment with exogenous human KRT2. Real-time quantitative PCR and Western blot analysis revealed that, Comparison of melanocytes in Alpaca skin treated with Fetal Bovine Serum Albumin 10 ng/m / L and 100 ng/m / L Human KTR2 in Alpaca skin tyrosinase (Tyr), tyrosine Associated protein 1 (Tyrp1) and microocular deformation-Associated transcription Factor (MIF) The relative expression level of three genes was significantly increased in the cells supplemented with 10 ng/m L KTR2 (P0.05), especially in the cells supplemented with 10 ng/m L KTR2. The relative protein expression levels were 2.1 times and 1.7 times of that of the control cells (P0.01), respectively, compared with the control cells (4 times, 10 times and 12.9 times (P0.01), respectively), and the relative protein expression levels of the cells were 2.1 times and 1.7 times of the control cells, respectively. The results of spectrophotometry showed that the melanin content of skin melanocytes treated with 1 ng/m / L 10 ng/m / L and 100 ng/m / L human KTR2 was 1.3-fold (P0.05) and 1.5-fold (P0.05) as compared with the control cells, respectively. These results suggest that human KTR2 treatment can promote melanin synthesis by stimulating melanocyte melanin synthesis signal pathway in alpaca skin.
【作者單位】： 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;
【基金】：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)(No.2013AA102506)) 公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專(zhuān)項(xiàng)(201303119)資助基金項(xiàng)目 山西省自然科學(xué)基金(2012011046-6)資助~~
【分類(lèi)號(hào)】：S829.9

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本文編號(hào)：2096840