本文選題：角蛋白 + 黑色素生成��； 參考：《中國生物化學與分子生物學報》2017年03期

【摘要】：基因表達譜顯示,綿羊角蛋白2(keratin2,Krt2)的mRNA在不同毛色皮膚的表達不同,暗示Krt2基因可能對皮膚黑色素生成有一定的影響。為探索角蛋白2對體外培養(yǎng)的羊駝皮膚黑色素細胞黑色素生成的影響,首先采用PCR擴增產物測序,結合DNAMAN軟件比對分析發(fā)現(xiàn),羊駝Krt2編碼序列(c DNA)與NCBI公布的人KRT2高度同源(91%);將人KRT2添加于培養(yǎng)的羊駝皮膚黑色素細胞,觀察人KRT2對羊駝皮膚黑色素細胞黑色素的生成作用。免疫組織化學顯示,外源性的人KRT2處理羊駝皮膚黑色素細胞72 h后,黑色素細胞的細胞質中Krt2表達增強。實時定量PCR及Western印跡實驗揭示,與胎牛血清清蛋白處理的羊駝皮膚黑色素細胞比較,1 ng/m L、10 ng/m L和100 ng/m L人KTR2處理的羊駝皮膚黑色素細胞酪氨酸酶(Tyr)、酪氨酸相關蛋白-1(Tyrp1)、小眼畸形相關轉錄因子(Mitf)基因表達明顯上調(P0.05);尤其在添加10 ng/m L KTR2的細胞中,3個基因的mRNA相對表達水平升高尤其顯著,分別是對照細胞的4倍、10倍和12.9倍(P0.01),蛋白質相對表達水平分別是對照細胞的2倍、2.1倍和1.7倍(P0.01)。分光光度法測量A490結果證明,1 ng/m L、10 ng/m L和100 ng/m L人KTR2處理的羊駝皮膚黑色素細胞產生的黑色素含量分別是對照細胞的1.3倍(P0.05)、1.8倍(P0.01)和1.5倍(P0.05)。上述結果說明,人KTR2處理可通過刺激羊駝皮膚黑色素細胞黑色素合成相關信號通路,促進黑色素的合成。
[Abstract]:Gene expression profiles showed that the mRNA expression of keratin2 (keratin2) was different in different skin, suggesting that Krt2 gene might have an effect on melanin production. In order to explore the effect of keratin 2 on melanin production in the skin of alpaca in vitro, the PCR amplification products were sequenced and the results were compared with DNA man software. Human KRT2 coding sequence (c DNA) was highly homologous to human KRT2 published by NCBI (91%), and human KRT2 was added to cultured melanocytes of alpaca skin to observe the effect of human KRT2 on melanin production in alpaca skin. Immunohistochemistry showed that the expression of Krt2 in the cytoplasm of melanocytes increased after 72 h treatment with exogenous human KRT2. Real-time quantitative PCR and Western blot analysis revealed that, Comparison of melanocytes in Alpaca skin treated with Fetal Bovine Serum Albumin 10 ng/m / L and 100 ng/m / L Human KTR2 in Alpaca skin tyrosinase (Tyr), tyrosine Associated protein 1 (Tyrp1) and microocular deformation-Associated transcription Factor (MIF) The relative expression level of three genes was significantly increased in the cells supplemented with 10 ng/m L KTR2 (P0.05), especially in the cells supplemented with 10 ng/m L KTR2. The relative protein expression levels were 2.1 times and 1.7 times of that of the control cells (P0.01), respectively, compared with the control cells (4 times, 10 times and 12.9 times (P0.01), respectively), and the relative protein expression levels of the cells were 2.1 times and 1.7 times of the control cells, respectively. The results of spectrophotometry showed that the melanin content of skin melanocytes treated with 1 ng/m / L 10 ng/m / L and 100 ng/m / L human KTR2 was 1.3-fold (P0.05) and 1.5-fold (P0.05) as compared with the control cells, respectively. These results suggest that human KTR2 treatment can promote melanin synthesis by stimulating melanocyte melanin synthesis signal pathway in alpaca skin.
【作者單位】： 山西農業(yè)大學動物科技學院;河南科技大學動物科技學院;
【基金】：國家高技術研究發(fā)展計劃(863計劃)(No.2013AA102506)) 公益性行業(yè)(農業(yè))科研專項(201303119)資助基金項目 山西省自然科學基金(2012011046-6)資助~~
【分類號】：S829.9

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