發(fā)布時(shí)間：2018-03-30 22:25

  本文選題：雞毒支原體　切入點(diǎn)：熱休克蛋白GrpE　出處：《中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年01期

【摘要】：雞毒支原體(MG)脂質(zhì)相關(guān)蛋白(LAMPs)的粘附特性在感染宿主細(xì)胞中起重要的作用,本實(shí)驗(yàn)室前期利用快速蛋白液相色譜和質(zhì)譜鑒定MG的grp E基因編碼的GrpE蛋白為熱休克蛋白。為進(jìn)一步鑒定GrpE蛋白是否具有粘附特性,本研究通過原核表達(dá)MG株grp E基因,并利用表達(dá)純化的重組蛋白GrpE(rGrpE)免疫BALB/c小鼠。制備抗GrpE的單克隆抗體(MAb)。通過亞細(xì)胞定位,結(jié)果顯示GrpE定位于細(xì)胞表面。通過激光共聚焦顯微鏡觀察到rGrpE對(duì)DF-1細(xì)胞具有明顯的粘附作用,而且利用抗GrpE的MAb能夠特異抑制MG膜蛋白對(duì)DF-1細(xì)胞的粘附。此外,夾心ELISA和流式細(xì)胞術(shù)試驗(yàn)結(jié)果也表明制備的MAb能夠顯著抑制MG膜蛋白對(duì)DF-1細(xì)胞的粘附,并呈劑量依賴關(guān)系。上述結(jié)果表明熱休克蛋白GrpE是MG的一種新的具有粘附特性的蛋白。
[Abstract]:The adhesion characteristics of MG- lipid associated protein (lamps) play an important role in the infection of host cells. In our laboratory, rapid protein liquid chromatography and mass spectrometry were used to identify the GrpE protein encoded by MG grp E gene as heat shock protein. In order to further identify whether the GrpE protein has adhesion properties, we expressed the grp E gene of MG strain by prokaryotic expression. BALB/c mice were immunized with the purified recombinant protein GrpEr GrpE. Monoclonal antibody against GrpE was prepared. The results showed that GrpE was located on the surface of DF-1 cells, and the adhesion of rGrpE to DF-1 cells was observed by confocal laser microscopy, and the adhesion of MG membrane proteins to DF-1 cells was specifically inhibited by anti-#en3# MAb. The results of sandwich ELISA and flow cytometry also showed that the prepared MAb could significantly inhibit the adhesion of MG membrane protein to DF-1 cells in a dose-dependent manner.
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/動(dòng)物支原體病創(chuàng)新團(tuán)隊(duì);東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院;吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;
【基金】：2016獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物支原體創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)經(jīng)費(fèi)
【分類號(hào)】：S852.62

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