本文關鍵詞：ITS測序分析方法在鑒定臨床酵母樣真菌中的應用

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【摘要】：目的：本課題旨在建立適用于本實驗室的臨床常見酵母樣真菌的ITS基因檢測方法,通過與質(zhì)譜法、API體系和念珠菌顯色平板培養(yǎng)法相比,評價其臨床應用價值。同時,初步探討ITS基因測序法直接檢測臨床標本的應用前景。方法：首先,設計一對針對多種常見酵母樣真菌ITS基因的通用引物,要求擴增的目的片段長度約400—600bp,片段的核酸序列具有種間多樣性,能到達通過測序來區(qū)分不同種酵母樣真菌的目的,并以16標準菌株對引物進行測試。其次,收集135株臨床的分離陽性菌株,同時用質(zhì)譜法、API體系和念珠菌顯色平板培養(yǎng)法方法進行檢測,比較各種鑒定方法的準確率和靈敏度。最后,收集20份經(jīng)實驗室常規(guī)鑒定的陽性臨床標本,再用ITS基因測序法直接進行鑒定,評價測序分析法直接檢測臨床樣本的鑒定效果。結果：設計的ITS基因擴增引物成功擴增與鑒定出所有的標準菌株。對135株臨床分離的陽性菌株的鑒定中,ITS測序、質(zhì)譜法、API體系和念珠菌顯色平板培養(yǎng)法方法陽性率分別為98.5%(133/135),78.5%(106/135),59.3%(80/135),經(jīng)χ2檢驗分析,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=51.996,P0.05)。其中有1株MS未能鑒定的菌,經(jīng)ITS基因擴增測序后,鑒定為皮炎外瓶霉菌。運用ITS測序方法還成功從20份原始標本中鑒定出致病酵母菌,與其他方法的檢測結果一致。結論：ITS序列分析方法能快速、準確地鑒定多種臨床酵母樣真菌。該方法在不經(jīng)培養(yǎng),直接從原始標本中進行檢測及鑒定的方向上也有重要的應用前景,是一種可促進臨床快速診斷致病真菌感染的方法。
【關鍵詞】：真菌 分子鑒定 ITS 測序
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R519;R440
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 引言8-13
• 第一部分 酵母樣真菌鑒定中ITS序列分析方法的應用評價13-20
• 1.1 材料和方法13-17
• 1.1.1 實驗標準菌株13
• 1.1.2 主要試劑和儀器13-14
• 1.1.3 方法14-17
• 2.1 結果17-18
• 2.1.1 PCR擴增結果17
• 2.1.2 ITS測序結果17-18
• 3.1 討論18-20
• 第二部分 ITS,MS及傳統(tǒng)方法在酵母樣真菌臨床檢測效果的比較20-28
• 1.1 材料與方法20-22
• 1.1.1 實驗菌株20
• 1.1.2 試劑20
• 1.1.3 方法20-22
• 2.1 實驗結果22-26
• 2.1.1 菌株復蘇情況22
• 2.1.2 顯色培養(yǎng)基鑒定結果22-23
• 2.1.3 VITEK MS鑒定結果23
• 2.1.4 測序結果23-25
• 2.1.5 結果比較25-26
• 3.1 討論26-28
• 第三部分 應用ITS序列分析法直接檢測臨床標本的酵母樣真菌的效果評價28-34
• 1.1 材料與方法28-31
• 1.1.1 標本來源28
• 1.1.2 主要試劑28
• 1.1.3 臨床常規(guī)真菌鑒定28-30
• 1.1.4 ITS基因序列分析測定30-31
• 2.1 結果31-33
• 3.1 討論33-34
• 結語34-36
• 參考文獻36-40
• 附錄40-49
• 附錄140-41
• 附錄241-49
• 參考文獻45-49
• 在校期間發(fā)表論文情況49-50
• 致謝50

【參考文獻】

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1 鄭冰;應春妹;汪雅萍;葉楊芹;張灝e，

本文編號：999178