本文關鍵詞：支原體巨噬細胞活化脂肽-2經(jīng)MAPKs途徑誘導THP-1細胞表達MMP-9

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【摘要】：支原體感染機體后主要通過單核、巨噬細胞清除病原體。其中單核細胞以阿米巴樣運動穿過血管內(nèi)皮細胞,隨后突破血管基底層和結締組織到達感染部位是發(fā)揮免疫應答的重要步驟。在此過程中,基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)能通過降解細胞外基質(zhì),從而參與炎癥反應以及血管生成等多種生物學效應,因而發(fā)揮著關鍵作用。臨床研究和動物實驗表明,支原體感染后,患者血清或大鼠羊水中MMP-9含量顯著增高,這表明MMP-9也參與了支原體感染后的炎癥反應。為了進一步了解支原體感染對MMP-9分泌的影響,本研究從以下幾方面進行體外研究:(1)培養(yǎng)人單核細胞系THP-1細胞,分別用0.1、1.0和5.0μg/mL的支原體巨噬細胞活化脂肽-2(MALP-2)刺激不同時間,用ELISA和Western blot分別檢測細胞培養(yǎng)上清中MMP-9的含量以及金屬蛋白酶組織抑制因子-1(TIMP-1)的表達;實時定量PCR觀察MMP-9以及TIMP-1 mRNA的表達水平;比色法分析MMP-9活性的變化。(2)THP-1細胞預先與絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制劑孵育30min,隨后用5μg/mL MALP-2刺激18h,ELISA觀察其對MMP-9分泌的影響。結果顯示:THP-1細胞基礎狀態(tài)下MMP-9和TIMP-1表達水平較低。當分別給予0.1、1.0和5.0μg/mL MALP-2作用18h后,可誘導THP-1細胞分泌MMP-9和表達TIMP-1,且隨著MALP-2濃度的增加,MMP-9的產(chǎn)生以及TIMP-1表達水平相應增加,但TIMP-1的增幅低于MMP-9;實時定量PCR的結果表明:不同濃度的MALP-2處理THP-1細胞16h后,也可上調(diào)細胞內(nèi)MMP-9和TIMP-1 mRNA的表達水平,但MMP-9 mRNA增高更顯著。同時MALP-2處理也可增加細胞培養(yǎng)上清中MMP-9的酶活性。此外,MALP-2作用THP-1細胞6h后即可上調(diào)MMP-9 mRNA表達,隨著時間的延長,mRNA表達水平逐漸增高,16h后達到峰值,并持續(xù)高表達至36h。THP-1細胞分別與30μmol/L SB203580(p38抑制劑)、SP600125(JNK抑制劑)和PD98059(ERK抑制劑)預處理后,可顯著抑制MALP-2對MMP-9的誘生作用。以上結果表明支原體MALP-2能經(jīng)MAPKs途徑誘導THP-1細胞表達MMP-9。
【關鍵詞】：支原體巨噬細胞活化脂肽-2 基質(zhì)金屬蛋白酶-9 金屬蛋白酶組織抑制因子-1 絲裂原活化蛋白激酶
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R518.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第1章 緒論10-14
• 第2章 材料和方法14-26
• 第3章 實驗結果26-30
• 第4章 討論30-34
• 第5章 結論34-36
• 參考文獻36-40
• 文獻綜述 呼吸系統(tǒng)疾病的炎癥信號通路研究進展40-52
• 參考文獻47-52
• 附錄52-54
• 科研成果54-55
• 資助基金55-56
• 致謝56

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本文編號：981595