本文關(guān)鍵詞：黃芩苷聯(lián)合連翹苷對甲型流感病毒核蛋白基因表達(dá)影響的體外實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的:初步探討黃芩苷聯(lián)合連翹苷對甲型流感病毒核蛋白基因(NP基因)表達(dá)的影響,為尋找高效的抗流感病毒中藥復(fù)方提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.采用細(xì)胞病變法(CPE)測試藥物(黃芩苷、連翹苷)對Hela細(xì)胞的最大無毒濃度,確定各種藥物的實(shí)驗(yàn)濃度;2.甲型流感病毒NP真核表達(dá)載體pc DNA3.1(+)/NP運(yùn)用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,作為實(shí)驗(yàn)用靶細(xì)胞,反轉(zhuǎn)錄-實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-q PCR)確定成功轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞;3.反轉(zhuǎn)錄-實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-q PCR)評價(jià)黃芩苷聯(lián)合連翹苷對靶細(xì)胞NP基因表達(dá)的影響,運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)軟件進(jìn)行分析;4.反轉(zhuǎn)錄-實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-q PCR)評價(jià)不同濃度黃芩苷、連翹苷對靶細(xì)胞NP基因表達(dá)的抑制作用,并計(jì)算黃芩苷、連翹苷對靶細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50);5.反轉(zhuǎn)錄-實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-q PCR)評價(jià)IC25、IC50劑量的黃芩苷聯(lián)合IC25、IC50、IC75劑量的連翹苷對靶細(xì)胞NP基因表達(dá)的聯(lián)合作用效果(協(xié)同、相加、拮抗)。本實(shí)驗(yàn)設(shè)Hela細(xì)胞組、脂質(zhì)體組、重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(轉(zhuǎn)染pc DNA3.1(+)/NP)、黃芩苷組、連翹苷組、黃芩苷聯(lián)合連翹苷組。結(jié)果:1.細(xì)胞病變法得出各種藥物的最大無毒濃度分別為:黃芩苷:31.25μg·ml-1,連翹苷:25μg·ml-1;實(shí)驗(yàn)濃度:黃芩苷:15.625μg·ml-1,連翹苷:12.5μg·ml-1;且黃芩苷(15.625μg·ml-1)聯(lián)合連翹苷(12.5μg·ml-1)顯示無毒。2.重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組NP基因表達(dá)量明顯高于Hela細(xì)胞組,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.742,P0.01);重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組NP基因表達(dá)量明顯高于脂質(zhì)體組,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.802,P0.01);說明流感病毒真核表達(dá)載體pc DNA3.1(+)/NP成功轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞。3.黃芩苷(15.625μg·ml-1)聯(lián)合連翹苷(12.5μg·ml-1)組NP基因表達(dá)量明顯低于重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.966,P0.01)。4.在一定濃度范圍內(nèi),黃芩苷、連翹苷對靶細(xì)胞NP基因表達(dá)有明顯的抑制作用,且抑制作用呈濃度依賴性;黃芩苷、連翹苷對靶細(xì)胞NP基因表達(dá)的IC50分別為:10.4627μg·ml-1,4.16832μg·ml-1。5.低濃度、中濃度黃芩苷(IC25、IC50)聯(lián)合低濃度、中濃度、高連翹苷(IC25、IC50、IC75)對靶細(xì)胞NP基因表達(dá)的抑制作用CI值分別為:IC25黃芩苷+IC25連翹苷:1.24169;IC25黃芩苷+IC50連翹苷:0.95414;IC25黃芩苷+IC75連翹苷:0.94745;IC50黃芩苷+IC25連翹苷:0.89460;IC50黃芩苷+IC50連翹苷:0.85482;IC50黃芩苷+IC75連翹苷:0.89201。低濃度黃芩苷聯(lián)合低濃度連翹苷起拮抗作用CI1;余濃度聯(lián)合起協(xié)同作用CI1。結(jié)論:黃芩苷聯(lián)合連翹苷能夠下調(diào)轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞的甲型流感病毒NP基因表達(dá)量,并且在一定濃度范圍內(nèi)顯示出協(xié)同作用。
【關(guān)鍵詞】：黃芩苷 連翹苷 聯(lián)合作用 中藥 甲型流感病毒 核蛋白(NP)
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R511.7
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-17
• 1.1 流行病學(xué)10
• 1.2 甲型流感病毒10-11
• 1.3 流感的預(yù)防和治療進(jìn)展11-13
• 1.3.1 流感疫苗研究進(jìn)展11-12
• 1.3.2 抗流感藥物研究進(jìn)展12-13
• 1.4 甲型流感病毒核蛋白13
• 1.5 基于核蛋白（NP）為靶點(diǎn)的抗病毒研究13-15
• 1.5.1 抗流感病毒核蛋白機(jī)制14
• 1.5.2 流感病毒核蛋白抑制劑14-15
• 1.6 中藥抗流感病毒研究狀況15-17
• 第2章 材料與方法17-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)對象17
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器17-18
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑18
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)藥物18-19
• 2.1.5 PCR引物19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-29
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)19-21
• 2.2.2 細(xì)胞病變法確定藥物的實(shí)驗(yàn)濃度21
• 2.2.3 甲型流感病毒NP真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)/NP質(zhì)粒提取21-22
• 2.2.4 pcDNA3.1(+)/NP質(zhì)粒濃度和純度的測定22-23
• 2.2.5 脂質(zhì)體法pcDNA3.1(+)／NP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及藥物干預(yù)23-24
• 2.2.6 TRIzol法總RNA提取與測定24
• 2.2.7 反轉(zhuǎn)錄PCR24-25
• 2.2.8 qPCR法制備標(biāo)準(zhǔn)曲線及NP基因起始表達(dá)量的測定25-27
• 2.2.9 數(shù)據(jù)處理27-29
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-36
• 3.1 藥物實(shí)驗(yàn)濃度結(jié)果29-30
• 3.2 甲型流感病毒NP真核表達(dá)載體PCDNA3.1(+)/NP標(biāo)準(zhǔn)曲線30-31
• 3.3 QPCR法測量NP基因的表達(dá)31-33
• 3.3.1 流感病毒真核表達(dá)載體pc DNA3.1(+)/NP轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞的檢測31-32
• 3.3.2 黃芩苷聯(lián)合連翹苷組細(xì)胞內(nèi)NP基因表達(dá)量32-33
• 3.4 不同濃度黃芩苷、連翹苷對靶細(xì)胞NP基因表達(dá)的抑制作用33-34
• 3.5 不同濃度黃芩苷聯(lián)合連翹苷對靶細(xì)胞NP基因表達(dá)的抑制作用及各組CI值34-36
• 第4章 討論36-40
• 第5章 結(jié)論與展望40-41
• 5.1 結(jié)論40
• 5.2 展望40-41
• 致謝41-42
• 參考文獻(xiàn)42-48
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果48-49
• 綜述49-59
• 參考文獻(xiàn)57-59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉燕;王林林;姚華;史玉柱;司麗君;張莉;黃華;;濱蒿總黃酮對流感病毒PR8株感染小鼠的保護(hù)作用[J];中藥藥理與臨床;2016年01期

2 吳婷;魏珊;李敏;張淑蓉;;山西道地連翹體外抗甲型流感病毒活性的研究[J];時(shí)珍國醫(yī)國藥;2016年01期

3 劉暢;錢彥方;胡京紅;朱宇婷;魏震;張秀霞;趙珈藝;孫紅梅;;益氣養(yǎng)陰除結(jié)方聯(lián)合順鉑對肺腺癌A549細(xì)胞生長及凋亡的影響[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2015年12期

4 劉明靜;;黃芩苷體外抗甲型流感病毒的實(shí)驗(yàn)研究[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;2015年11期

5 張照研;張會敏;周U，

本文編號：843765