發(fā)布時(shí)間：2017-08-21 22:09

  本文關(guān)鍵詞：中國(guó)B.afzelii基因型萊姆病螺旋體GDsh1表面蛋白VlsE保守區(qū)段的克隆表達(dá)及抗原性分析

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【摘要】：目的克隆表達(dá)中國(guó)萊姆病螺旋體B.afzelii基因型菌株GDsh1的表面蛋白VlsE保守區(qū)段,并對(duì)其抗原性進(jìn)行分析,為制備中國(guó)萊姆病重組抗原ELISA檢測(cè)試劑盒提供依據(jù)。方法結(jié)合文獻(xiàn),下載并比對(duì)PubMed上所有萊姆病螺旋體B.a型菌株的VlsE基因序列,確定保守區(qū)段,設(shè)計(jì)引物,擴(kuò)增GDsh1的VlsE基因片段。將擴(kuò)增產(chǎn)物與載體PET-32a連接,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)。對(duì)重組載體進(jìn)行序列測(cè)定,表達(dá)產(chǎn)物用SDS-PAGE和Western blot分析。利用重組VlsE蛋白制備ELISA試劑盒,檢測(cè)83份萊姆病陽(yáng)性血清,90份陰性血清以及90份梅毒血清,計(jì)算重組試劑盒的靈敏度和特異性。并與科室已有的全菌蛋白ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果成功克隆表達(dá)了B.afzelii型VlsE保守區(qū)蛋白,Western blot結(jié)果顯示VlsE保守區(qū)蛋白與免疫兔血清有較強(qiáng)的抗原抗體反應(yīng)。ELISA結(jié)果表明:重組VlsE蛋白的靈敏度60.2%低于全菌蛋白的靈敏度92.8%(P0.001);特異性分別為73.3%、68.9%,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.511)。在檢測(cè)梅毒血清上特異性分別為83.3%、18.9%,重組蛋白的特異性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于全菌蛋白(P0.001)。結(jié)論重組VlsE基因保守區(qū)段蛋白在萊姆病的檢測(cè)中具有一定的靈敏度和特異性,且在區(qū)分梅毒血清與萊姆病血清上,其特異性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于全菌蛋白,在萊姆病血清學(xué)檢測(cè)中具有不容忽視的重要意義。
【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所傳染病預(yù)防控制國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 萊姆病螺旋體 VlsE蛋白 克隆表達(dá) 抗原性分析
【基金】：國(guó)家科技重大專項(xiàng)(No.2013ZX10004-001,No.2013ZX10004-101)~~
【分類號(hào)】：R514
【正文快照】： 萊姆病是一種蜱傳的人獸共患病,其病原體為伯氏疏螺旋體。萊姆病臨床征狀包括:游走性紅斑,面神經(jīng)麻痹,神經(jīng)根炎,心臟病,關(guān)節(jié)炎和慢性萎縮性肢皮炎等,嚴(yán)重的導(dǎo)致終身殘疾,甚至死亡[1]。因?yàn)槿R姆病的臨床癥狀復(fù)雜多樣,所以萊姆病的實(shí)驗(yàn)室輔助診斷尤為重要。目前萊姆病的實(shí)驗(yàn)室診

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：715384