本文關鍵詞：志賀菌外排泵AcrAB-TolC及其調控基因突變與氟喹諾酮耐藥性關系的研究

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【摘要】：志賀菌屬細菌是導致細菌性痢疾的主要病原菌,志賀菌多重耐藥株逐年增多。隨著抗菌藥物的廣泛使用,志賀菌耐藥問題越來越嚴重。氟喹諾酮類藥物,因其獨特的作用機制,抗菌譜廣,良好的抗菌活性和優(yōu)秀的藥物動力學等特征,成為臨床治療細菌性痢疾的一線藥物。但隨之出現(xiàn)的耐氟喹諾酮菌株也逐年增加。細菌對氟喹諾酮產(chǎn)生耐藥的機制主要包括:染色體介導的靶位酶基因突變、質粒介導的外排泵基因qepA、質粒攜帶的氨基糖苷乙酰轉移酶的變異基因aac(6’)-Ib-cr、細胞膜孔蛋白缺失或表達下降、膜主動外排泵基因激活(主要是acrAB-tolC系統(tǒng))或過度表達等。研究表明,主動外排系統(tǒng)是細菌產(chǎn)生多重耐藥的主要原因,尤其是耐藥結節(jié)細胞分化家族(resistance-nodulation-division RND)成員對細菌獲得性耐藥起重要作用,目前國內(nèi)外研究較多的耐多藥外排泵是大腸埃希菌AcrAB-TolC�，F(xiàn)有研究表明,該泵在志賀菌屬細菌中也存在,調控基因marOR突變可能對耐藥性產(chǎn)生影響。研究目的:了解和掌握天津市三家醫(yī)院臨床分離志賀菌的血清型分布及主要流行型別;志賀菌臨床株對臨床常用抗菌藥物的耐藥情況;對氟喹諾酮耐藥株從染色體靶位酶基因、外排泵AcrAB-TolC泵基因acrA、acrB及其調控基因marOR、acrR、soxS及質粒介導的外排泵基因qepA基因進行擴增并測序,探討上述基因突變與氟喹諾酮類耐藥之間的關系。材料與方法:本研究收集2009年-2013年天津醫(yī)科大學總醫(yī)院、天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院、天津市兒童醫(yī)院腸道門診分離的志賀菌臨床株。1,采用血清凝集法確定血清型,明確本地區(qū)近年流行的主要血清型。2,采用K-B紙片擴散法測定志賀菌臨床株對17種臨床常用抗生素的敏感性。應用萘啶酸、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星和諾氟沙星5種抗菌藥物篩選出氟喹諾酮耐藥臨床株。3,通過PCR擴增技術對志賀菌臨床株的gyrA、parC基因、外排泵AcrAB-TolC泵基因acrA和acrB、外排泵調控基因marOR、acrR、soxS及質粒外排泵基因qepA基因進行擴增、測序,測序結果在Genebank上進行比對。實驗結果:1、經(jīng)常規(guī)生化及血清凝集實驗證實,159株受試菌株中福氏志賀菌57株,宋內(nèi)志賀菌102株。福氏志賀菌包括F1a,1b,F2a,F2b,F3a,F3b,F4a,F4b,F5a,F5b,F6,Fx,Fy亞型。2、藥敏結果顯示:臨床分離志賀菌對萘啶酸耐藥率最高,為98.49%,其次為鏈霉素94.33%、氯霉素93.71%。對頭孢曲松、頭孢噻肟和頭孢哌酮的耐藥率分別為1.25%、1.25%和0.62%。未發(fā)現(xiàn)對亞胺培南耐藥。對氧氟沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星耐藥率分別為4.71%、5.03%、3.14%,對左氧氟沙星耐藥率為1.88%。159株志賀氏菌中多重耐藥株156株,占全部受試菌株的98.11%。喹諾酮類耐藥株11株,其中耐三種及三種以上氟喹諾酮類抗菌藥的有7株,占63.63%;11株氟喹諾酮耐藥菌對萘啶酸的耐藥率100.00%,對環(huán)丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星和左氧氟沙星的耐藥率分別為72.72%、45.45%、63.63%和27.27%。3、11株氟喹諾酮耐藥株和8株氟喹諾酮敏感株均擴增出gyrA、parC基因;4株耐藥菌可見gyr A 83(Ser→Leu)及parC 80(Ser→IIe)位突變;1株耐藥菌僅有parC80(Ser→IIe)位突變,2株耐藥菌gyrA205苯丙氨酸缺失;其余4株耐藥菌gyrA和parC均未突變;8株敏感株均未發(fā)現(xiàn)gyrA和parC突變。10株耐藥菌和4株敏感菌acrA、acrB、marOR、soxS和acrR基因擴增呈陽性。acrA、acrB、acrR、soxS基因有散在點突變存在。10株氟喹諾酮耐藥菌marOR基因都存在第36、37、38、39位CATT堿基缺失,而氟喹諾酮敏感菌株中marOR未見上述位點CATT缺失。所有氟喹諾酮耐藥菌及敏感菌株均未擴增出qepA基因。結論:2009年-2013年天津市三家醫(yī)院臨床分離志賀菌血清型主要為宋內(nèi)志賀菌,其次為福氏志賀菌。志賀菌對臨床多種常用抗生素耐藥率較高,多重耐藥菌株比例高達98.11%。外排泵調控基因marOR第36、37、38、39位CATT堿基缺失可能與志賀菌對氟喹諾酮耐藥有關。
【關鍵詞】：志賀菌屬 耐藥性 氟喹諾酮 外排泵 acrAB-tolC marOR
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R516.4;R446.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-15
• 研究現(xiàn)狀、成果11-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、志賀菌臨床株血清鑒定、分布及耐藥性分析15-29
• 1.1 材料和方法15-18
• 1.1.1 實驗材料15-16
• 1.1.2 實驗方法16-18
• 1.2 結果18-24
• 1.2.1 血清鑒定結果18-20
• 1.2.2 藥敏結果20-24
• 1.3 討論24-28
• 1.3.1 志賀菌血清型分布24-26
• 1.3.2 志賀菌耐藥性26-27
• 1.3.3 志賀菌多重耐藥性27
• 1.3.4 不同血清型志賀菌耐藥性不同27-28
• 1.4 小結28-29
• 二、志賀菌外排泵AcrAB-TolC及其調控基因突變與氟喹諾酮耐藥性的關系29-41
• 2.1 材料與方法29-32
• 2.1.1 材料29-30
• 2.1.2 實驗方法30-32
• 2.2 結果32-39
• 2.2.1 基因擴增結果32-35
• 2.2.3 gyrA、parC基因測序35
• 2.2.4 acrA基因測序35-36
• 2.2.5 acrB基因測序36-37
• 2.2.6 acrR基因測序37
• 2.2.7 marOR基因測序37-38
• 2.2.8 soxS基因測序38-39
• 2.3 討論39-40
• 2.4 小結40-41
• 結論41-42
• 參考文獻42-48
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明48-49
• 綜述 志賀菌對氟喹諾酮類耐藥機制的研究進展49-59
• 綜述參考文獻54-59
• 致謝59

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 朱靜媛,段廣才,張梅喜;73株志賀菌屬細菌對11種抗生素的耐藥性分析[J];河南預防醫(yī)學雜志;2004年01期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 朱靜媛;志賀菌屬細菌耐藥性及其耐喹諾酮類藥物機制的研究[D];鄭州大學;2002年

2 符幸濤;實驗室誘導志賀菌屬耐喹諾酮類抗生素靶基因突變時序檢測[D];鄭州大學;2007年

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本文編號：596517