本文關(guān)鍵詞：HBx轉(zhuǎn)染肝前體細(xì)胞后的體內(nèi)作用研究

  更多相關(guān)文章： 乙型肝炎病毒x蛋白 肝前體細(xì)胞 門靜脈 小鼠模型 cyclinD1

【摘要】：目的構(gòu)建表達(dá)乙肝病毒x基因(HBx)的肝前體細(xì)胞,并經(jīng)小鼠門靜脈注射建立肝內(nèi)移植模型,取移植后小鼠肝組織,檢測(cè)HBx表達(dá)、細(xì)胞周期蛋白cyclin D1的改變,為探討乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)對(duì)肝前體細(xì)胞的作用和影響及其在原發(fā)性肝癌(HCC)發(fā)病機(jī)制中的作用奠定了基礎(chǔ)。方法將空載體Ad-GFP和表達(dá)HBx的腺病毒Ad-HBx-GFP分別感染小鼠肝前體細(xì)胞,Western blot法和實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)HBx基因和蛋白在肝前體細(xì)胞內(nèi)的陽性表達(dá),經(jīng)小鼠門靜脈注射感染后的肝前體細(xì)胞,空白對(duì)照組注射等量生理鹽水,3天,7天,14天分別取小鼠肝臟組織,冰凍切片鏡下直接觀察綠色熒光蛋白表達(dá)量,免疫組織化學(xué)法觀察HBx陽性染色情況,Western blot法和實(shí)時(shí)定量PCR(real time-PCR)法分別檢測(cè)HBx在蛋白質(zhì)及mRNA水平的表達(dá)情況,設(shè)立空白組(注射等量生理鹽水組)、14-19/Ad-GFP(空載體AD-GFP感染組)為對(duì)照組,以鑒定細(xì)胞移植后是否在小鼠肝組織內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)；取移植后7天的小鼠肝組織,Western blot法和實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)周期蛋白cyclinD1在蛋白水平和mRNA水平表達(dá)情況。結(jié)果經(jīng)Ad-HBx-GFP感染后的肝前體細(xì)胞,通過western blot和PCR檢測(cè)到HBx蛋白和基因的陽性表達(dá),細(xì)胞移植后成功構(gòu)建了表達(dá)HBx并靶向針對(duì)肝前體細(xì)胞的小鼠模型。1.綠色熒光蛋白表達(dá)量、免疫組化陽性細(xì)胞數(shù)量及血清ALT均在注射后第7天達(dá)到高峰,RT-PCR及Western blot均檢測(cè)到第7天14-19/Ad-HBx-GFP組小鼠肝組織目的基因及蛋白的特異性表達(dá),與14-19/Ad-GFP組及生理鹽水注射組相比結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.通過western blot和PCR檢測(cè)注射后第7天小鼠肝組織的周期蛋白cyclin D1在蛋白水平和mRNA水平表達(dá)情況,陽性對(duì)照組14-19/Ad-HBx-GFP cyclinD1的mRNA和蛋白表達(dá)量較陰性對(duì)照組14-19/Ad-GFP和生理鹽水注射組相比均有所增高(P0.05)。結(jié)論1.成功構(gòu)建了表達(dá)HBx并攜帶GFP熒光蛋白的肝前體細(xì)胞(14-19)：2.成功構(gòu)建了表達(dá)HBx并靶向針對(duì)肝前體細(xì)胞的小鼠模型；3.第7天陽性對(duì)照組14-19/Ad-HBx-GFP cyclin D1的蛋白和mRNA表達(dá)量顯著增加,HBx可能促進(jìn)了肝細(xì)胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：乙型肝炎病毒x蛋白 肝前體細(xì)胞 門靜脈 小鼠模型 cyclinD1
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R512.62
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照6-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-16
• 參考文獻(xiàn)14-16
• 第一部分 表達(dá)HBx并攜帶GFP的肝前體細(xì)胞14-1916-26
• 1 材料16-19
• 2 方法19-24
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-25
• 4 結(jié)論25-26
• 第二部分 表達(dá)HBx的肝前體細(xì)胞的小鼠肝內(nèi)移植模型的構(gòu)建26-35
• 1 材料26-28
• 2 方法28-33
• 3 結(jié)果33-34
• 4 結(jié)論34-35
• 第三部分 表達(dá)HBx的肝前體細(xì)胞的小鼠肝內(nèi)移植模型中肝組織內(nèi)cyclin D1表達(dá)的改變35-40
• 1 材料35-36
• 2 方法36-38
• 3 數(shù)據(jù)分析38
• 4 結(jié)果38-39
• 5 結(jié)論39-40
• 討論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-42
• 附圖42-48
• 文獻(xiàn)綜述：HBx對(duì)肝前體細(xì)胞的影響及其在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制48-56
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 致謝56-57
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章57

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9 謝尚U，

本文編號(hào)：568502