本文關(guān)鍵詞：HBx轉(zhuǎn)染肝前體細胞后的體內(nèi)作用研究

  更多相關(guān)文章： 乙型肝炎病毒x蛋白 肝前體細胞 門靜脈 小鼠模型 cyclinD1

【摘要】：目的構(gòu)建表達乙肝病毒x基因(HBx)的肝前體細胞,并經(jīng)小鼠門靜脈注射建立肝內(nèi)移植模型,取移植后小鼠肝組織,檢測HBx表達、細胞周期蛋白cyclin D1的改變,為探討乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)對肝前體細胞的作用和影響及其在原發(fā)性肝癌(HCC)發(fā)病機制中的作用奠定了基礎(chǔ)。方法將空載體Ad-GFP和表達HBx的腺病毒Ad-HBx-GFP分別感染小鼠肝前體細胞,Western blot法和實時定量PCR法檢測HBx基因和蛋白在肝前體細胞內(nèi)的陽性表達,經(jīng)小鼠門靜脈注射感染后的肝前體細胞,空白對照組注射等量生理鹽水,3天,7天,14天分別取小鼠肝臟組織,冰凍切片鏡下直接觀察綠色熒光蛋白表達量,免疫組織化學(xué)法觀察HBx陽性染色情況,Western blot法和實時定量PCR(real time-PCR)法分別檢測HBx在蛋白質(zhì)及mRNA水平的表達情況,設(shè)立空白組(注射等量生理鹽水組)、14-19/Ad-GFP(空載體AD-GFP感染組)為對照組,以鑒定細胞移植后是否在小鼠肝組織內(nèi)穩(wěn)定表達；取移植后7天的小鼠肝組織,Western blot法和實時定量PCR法檢測周期蛋白cyclinD1在蛋白水平和mRNA水平表達情況。結(jié)果經(jīng)Ad-HBx-GFP感染后的肝前體細胞,通過western blot和PCR檢測到HBx蛋白和基因的陽性表達,細胞移植后成功構(gòu)建了表達HBx并靶向針對肝前體細胞的小鼠模型。1.綠色熒光蛋白表達量、免疫組化陽性細胞數(shù)量及血清ALT均在注射后第7天達到高峰,RT-PCR及Western blot均檢測到第7天14-19/Ad-HBx-GFP組小鼠肝組織目的基因及蛋白的特異性表達,與14-19/Ad-GFP組及生理鹽水注射組相比結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異。2.通過western blot和PCR檢測注射后第7天小鼠肝組織的周期蛋白cyclin D1在蛋白水平和mRNA水平表達情況,陽性對照組14-19/Ad-HBx-GFP cyclinD1的mRNA和蛋白表達量較陰性對照組14-19/Ad-GFP和生理鹽水注射組相比均有所增高(P0.05)。結(jié)論1.成功構(gòu)建了表達HBx并攜帶GFP熒光蛋白的肝前體細胞(14-19)：2.成功構(gòu)建了表達HBx并靶向針對肝前體細胞的小鼠模型；3.第7天陽性對照組14-19/Ad-HBx-GFP cyclin D1的蛋白和mRNA表達量顯著增加,HBx可能促進了肝細胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：乙型肝炎病毒x蛋白 肝前體細胞 門靜脈 小鼠模型 cyclinD1
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R512.62
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照6-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-16
• 參考文獻14-16
• 第一部分 表達HBx并攜帶GFP的肝前體細胞14-1916-26
• 1 材料16-19
• 2 方法19-24
• 3 實驗結(jié)果24-25
• 4 結(jié)論25-26
• 第二部分 表達HBx的肝前體細胞的小鼠肝內(nèi)移植模型的構(gòu)建26-35
• 1 材料26-28
• 2 方法28-33
• 3 結(jié)果33-34
• 4 結(jié)論34-35
• 第三部分 表達HBx的肝前體細胞的小鼠肝內(nèi)移植模型中肝組織內(nèi)cyclin D1表達的改變35-40
• 1 材料35-36
• 2 方法36-38
• 3 數(shù)據(jù)分析38
• 4 結(jié)果38-39
• 5 結(jié)論39-40
• 討論40-41
• 參考文獻41-42
• 附圖42-48
• 文獻綜述：HBx對肝前體細胞的影響及其在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機制48-56
• 參考文獻51-56
• 致謝56-57
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章57

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何力鵬 ,姜宇;人類血液中的平滑肌前體細胞[J];醫(yī)學(xué)信息;2003年01期

2 譚新杰;胡長林;蔡文琴;;正常成年大鼠神經(jīng)元前體細胞的遷移[J];解剖學(xué)報;2006年05期

3 李宗哲;李陽;宗兆文;張連陽;;皮膚源性前體細胞的生物學(xué)特性與臨床應(yīng)用[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年32期

4 陸漢明,龔一飛,徐文正,顧鶴定;自身花環(huán)形成試驗的方法學(xué)探討和初步應(yīng)用[J];上海免疫學(xué)雜志;1983年03期

5 李立新;;皮膚源性前體細胞在神經(jīng)再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J];中華腦科疾病與康復(fù)雜志(電子版);2013年03期

6 高殿帥,徐夏紅,張鳳真,王德廣,王婷,董紅燕,張光毅;堿性成纖維細胞生長因子對腦室下層神經(jīng)元前體細胞的影響[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2000年03期

7 劉燕;李法琦;張彬;駱建平3;;重組人促紅細胞生成素干預(yù)人源羊水干細胞向心肌前體細胞的分化[J];中國組織工程研究;2012年10期

8 白光文;申利紅;盧永良;李紅麗;馮濤;黃佳yN;;乙肝病毒X蛋白對肝前體細胞分化的影響[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2012年10期

9 楊俊林;曹啟林;邱猛生;;從小鼠大腦皮層制備高純度膠質(zhì)限制前體細胞[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2013年11期

10 姚正兵,劉璉;流行性出血熱病毒在體外培養(yǎng)的粒-單系前體細胞中增殖的研究[J];免疫學(xué)雜志;1991年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張偉濤;李衛(wèi)紅;劉保清;王萍;李文;張海燕;;人肝前體細胞定向成熟肝實質(zhì)細胞分化的體外研究[A];“細胞活動 生命活力”——中國細胞生物學(xué)學(xué)會全體會員代表大會暨第十二次學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2011年

2 楊愛婷;孫亞朦;賈繼東;王寶恩;尤紅;;肝臟前體細胞與星狀細胞的關(guān)系及在纖維化中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十六次全國病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

3 鄭曉東;魏海明;田志剛;;IL-2與IL-15在NK前體細胞分化中的不同作用[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

4 何yN;孟恒星;張宇光;侯士芳;李茜;韓俊領(lǐng);邱錄貴;韓忠朝;;從臍血CD34~+細胞定向擴增巨核前體細胞的生物學(xué)特性研究[A];第11次中國實驗血液學(xué)會議論文匯編[C];2007年

5 陸乃升;束剛;王松波;王麗娜;朱曉彤;高萍;江青艷;;Phloretin對豬肌內(nèi)與皮下脂肪前體細胞分化與相關(guān)基因表達的影響[A];全國動物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2012年

6 宮念樵;李幸;戴曉敏;馬俊磊;汪晶;;Blimp1-siRNA基因治療對髓源性DC前體細胞分化的影響[A];2013中國器官移植大會論文匯編[C];2013年

7 史敦云;汪明春;李明;張瓊麗;卓家才;杜新;劉煥勛;;循環(huán)中DC2前體細胞來源于骨髓的補充證據(jù)[A];第10屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2005年

8 陳俊;鐘翠萍;邱建華;;耳蝸前體細胞分化的微環(huán)境對神經(jīng)干細胞分化的影響[A];2010全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

9 鄒巖;李衛(wèi)紅;王萍;王一松;白日星;張海燕;;人胚胎肝前體細胞大鼠體內(nèi)移植實驗研究[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會第九次會員代表大會暨青年學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2007年

10 潘春華;羅榮城;丁雪梅;王傳斌;盧惠芳;張軍一;廖旺軍;;培養(yǎng)DC的實驗研究[A];第七屆全國腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2001年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 記者 彭德倩 通訊員 黃艾嬌;哺乳動物“心跳的秘密”揭開一角[N];解放日報;2013年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃佳yN;永生化肝前體細胞株的構(gòu)建及維甲酸在肝前體細胞分化中的作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

2 徐靜;皮膚源性前體細胞體外分化與細胞體內(nèi)移植延緩失神經(jīng)肌肉萎縮的實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

3 陳俊;新生大鼠耳蝸前體細胞分化的分子機制及微環(huán)境的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

4 姚靜;視網(wǎng)膜前體細胞向視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞分化的實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

5 鄒慶劍;人成纖維細胞轉(zhuǎn)分化形成神經(jīng)元前體細胞的研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2013年

6 譚新杰;1.成年大鼠局灶性腦梗死后神經(jīng)元前體細胞的發(fā)生及遷移的實驗研究 2.缺氧誘導(dǎo)因子-1α基因修飾的神經(jīng)干細胞移植治療腦梗死的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2006年

7 王磊;胰腺內(nèi)分泌前體細胞的培養(yǎng)及促成熟作用實驗研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

8 鐘翠萍;c-Myc及CyclinA2基因誘導(dǎo)大鼠耳蝸前體細胞增殖的體外研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

9 李曉u&;Nkx2.2與Sp8/Sp9的相互抑制作用特化脊髓p3和pMN前體細胞的命運[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

10 唐慶賀;大鼠肝前體細胞的體外雙向分化模型的建立及基于iTRAQ技術(shù)的WB-F344細胞向膽管細胞分化過程中的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 毛歡歡;神經(jīng)元前體細胞分化過程中BAI1分子的生物功能研究[D];電子科技大學(xué);2015年

2 祝旭龍;骨髓間充質(zhì)干細胞向肝前體細胞定向分化的體外實驗研究[D];延安大學(xué);2015年

3 鐘沁;HBx轉(zhuǎn)染肝前體細胞后的體內(nèi)作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

4 張敏;胸腺素β4促進肝前體細胞分化為肝細胞的體外研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

5 劉雪花;基于遷移學(xué)習(xí)的幼稚前體細胞和骨小梁識別研究[D];華東師范大學(xué);2014年

6 李幸;慢病毒載體介導(dǎo)Blimp1-shRNA反義基因治療調(diào)控髓源性DC前體細胞分化的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

7 邢蔚;miR-182在耳蝸前體細胞增殖和分化中的作用及機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

8 胡代曦;wnt3a,wnt3誘導(dǎo)小鼠肝前體細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及遷移的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

9 謝尚U，

本文編號：568502