本文關鍵詞：梅毒螺旋體假定蛋白Tp0693的表達及其在臨床檢測中的初步應用

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【摘要】：目的:構建梅毒螺旋體假定蛋白Tp0693的原核表達載體,并在大腸埃希菌中誘導表達,探討其在梅毒臨床血清學診斷中的價值,為發(fā)現(xiàn)新的Tp候診抗原提供實驗依據(jù)。方法:Tp0693基因序列從數(shù)據(jù)庫Genbank中查取,設計上下游雙引物,以Tp Nichols標準株DNA為模板,PCR擴增Tp0693基因片段;構建載體pET30a-Tp0693,經(jīng)IPTG誘導,在E.coliBL21(DE3)菌中表達,純化后包被于酶標板,建立ELISA法,檢測各期梅毒血清(201例)、交叉血清(66例)和陰性血清(100例),用統(tǒng)計學方法與TPPA、RPR法檢測結果進行比較,初步評價Tp0693-ELISA在梅毒血清學診斷中的應用價值。結果:(1)PCR擴增出與目的基因大小相符的片段,經(jīng)雙酶切、測序鑒定證實插入重組質粒的片段為目的基因片段Tp0693;(2)SDS-PAGE結果顯示誘導表達的蛋白相對分子量約為50kDa,WB檢測顯示目的蛋白Tp0693與抗His抗體和梅毒陽性血清有特異性免疫反應;(3)Tp0693-ELISA測定的S/CO值從低到高分組,統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)各組TPPA和RPR檢測陽性率隨S/CO值增加而增加。當S/CO≥3.001時,TPPA和RPR檢測陽性率,分別達到100%和79.56%,用統(tǒng)計軟件SPSS17.0進行趨勢性X2檢驗,P值都0.01;(4)以Tp0693-ELISA測定的S/CO值為檢測變量,TPPA為陰陽性判斷金標準,做ROC曲線,曲線下面積0.990,說明診斷效果好;(5)以S/CO值2.721為陰陽性評判界點,此時Tp0693-ELISA檢測特異性為100%,敏感性為91%,與TPPA法檢測結果一致性好,比RPR法敏感性高;(6)用統(tǒng)計軟件SPSS17.0對梅毒陽性標本Tp0693-ELISA測定S/CO值和TPPA、RPR檢測滴度進行相關性統(tǒng)計分析,Tp0693-ELISA測定S/CO值與TPPA檢測滴度的相關系數(shù)為0.116,P0.05,與RPR檢測滴度的相關系數(shù)為0.176,P0.05,說明梅毒陽性標本Tp0693-ELISA法S/CO值與TPPA、RPR檢測滴度不相關;(7)以S/CO值從1.368到2.721作為Tp0693-ELISA法的檢測灰區(qū),統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)梅毒標本中,灰區(qū)標本在隱性梅毒中比例較高,為14.8%(16/108);交叉血清中,灰區(qū)標本在傷寒和風濕病中比例較高,分別為80%(8/10)和55.2%(16/29)。TPPA、RPR檢測滴度從高到低在灰區(qū)都有分布。結論:基于p ET30a-Tp0693重組表達蛋白建立的Tp0693-ELISA具有高度特異性、較好的敏感性,Tp0693可望成為Tp候選診斷抗原。
【關鍵詞】：梅毒螺旋體 Tp0693 血清學診斷 ELISA
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R759.1;R446.6
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 主要縮略語英文索引10-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 實驗材料14-16
• 第3章 實驗方法16-30
• 第4章 實驗結果30-44
• 第5章 討論44-46
• 第6章 結論46-48
• 參考文獻48-50
• 附錄50-52
• 文獻綜述 梅毒實驗室診斷方法及其應用進展52-65
• 參考文獻60-65
• 碩士期間發(fā)表論文情況65-67
• 致謝67

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