發(fā)布時間：2017-05-29 20:08

  本文關(guān)鍵詞：甲型流感病毒感染對香煙煙霧所致慢性阻塞性肺疾病炎癥反應(yīng)的影響及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一種以持續(xù)性氣道炎癥和氣流受限為特征的慢性肺部疾病,由于該病具有流行性廣和高致死率等特點,其發(fā)病機制已成為近年來研究的熱點。香煙煙霧(Cigarette smoke extract,CSE)是COPD發(fā)生的主要誘因,研究表明,COPD人群中70%為長期吸煙者,吸煙人群中有20%可發(fā)展為COPD,但CSE誘發(fā)COPD的機制尚未明確。目前認為,CSE引起肺部炎癥反應(yīng)表現(xiàn)為巨噬細胞和中性粒細胞等炎癥細胞大量聚集,支氣管和肺黏膜分泌多種炎癥細胞因子和趨化因子,進而引起機體全身性炎癥反應(yīng),造成對心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的損傷,而COPD急性發(fā)作(Acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)是導(dǎo)致COPD患者住院率和死亡率居高不下的主要因素。鼻病毒、流感病毒和呼吸道合胞病毒等呼吸道病毒感染是AECOPD的主要誘導(dǎo)因素,其中流感病毒感染近年呈上升趨勢。隨著對固有免疫應(yīng)答的認識不斷加深,流感病毒感染誘發(fā)AECOPD很有可能是其影響了機體的固有免疫應(yīng)答,從而使COPD的炎癥反應(yīng)加重造成的。由此可見,以固有免疫應(yīng)答為對象,研究流感病毒感染COPD誘發(fā)的炎癥反應(yīng)及其機制具有切實的意義。本研究主要分為體內(nèi)和體外兩部分實驗進行。體外實驗首先采用CSE暴露法建立COPD細胞模型,以MTT法測定CSE對人肺癌上皮細胞系A(chǔ)549的半數(shù)抑制濃度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)。具體實驗分為正常對照組(細胞培養(yǎng)液),煙霧組(CSE),病毒組(100TCID50),病毒-煙霧混合組(CSE+100TCID50)。各實驗組造模后,用ELISA法分別測定細胞上清液中炎癥細胞因子IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α的表達量。提取A549細胞總RNA,用實時定量PCR法檢測各組細胞中核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3(Nucleotide binding ligomerization domain receptor protein 3,NLRP3)和半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)m RNA的相對表達量。體內(nèi)實驗采用被動吸煙法建立COPD小鼠模型。具體實驗分為正常對照組(正常飼養(yǎng)),煙霧組(煙熏),病毒組(100TCID50),病毒-煙霧混合組(煙熏+100TCID50)。造模結(jié)束后取小鼠氣管和肺組織,進行HE染色和AB-PAS染色,并用免疫組化法測定NLRP3和Caspase-1蛋白的表達量;取小鼠肺組織進行勻漿,用ELISA法測定炎癥細胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α的相對表達量。結(jié)果顯示,CSE對A549細胞的IC50為20%。體內(nèi)實驗和體外實驗中,與正常對照組相比,煙霧組炎癥細胞因子IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α的表達量顯著升高(P0.05,P0.01);與煙霧組相比,病毒-煙霧混合組炎癥細胞因子IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α的表達量顯著升高(P0.05,P0.01)。實驗組(煙霧組、病毒組、病毒-煙霧混合組)小鼠氣管和肺組織HE染色和AB-PAS染色結(jié)果符合臨床COPD病理改變,煙霧組和病毒組小鼠氣管上皮細胞出現(xiàn)脫落、壞死,杯狀細胞增加,肺組織和氣管粘膜下層出現(xiàn)炎癥細胞浸潤,肺組織結(jié)構(gòu)不完整;病毒-煙霧混合組小鼠氣管上皮細胞大量脫落,杯狀細胞顯著增加,肺組織和氣管粘膜下層出現(xiàn)大量炎癥細胞浸潤,肺組織結(jié)構(gòu)嚴重破壞。A549細胞和小鼠肺組織NLRP3和Caspase-1蛋白/m RNA檢測結(jié)果顯示,煙霧組沒有NLRP3和Caspase-1蛋白/m RNA的顯著增加(P0.05),與煙霧組和病毒組相比,病毒-煙霧混合組NLRP3和Caspase-1蛋白/m RNA均有顯著升高(P0.01)。綜上,CSE通過激活了IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α等固有免疫分子,使肺上皮細胞產(chǎn)生了炎癥反應(yīng),而甲型流感病毒感染通過調(diào)控NLRP3和Caspase-1的表達,進而進一步加重了氣道炎癥反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：香煙煙霧 慢性阻塞性肺疾病 炎癥 甲型流感病毒 固有免疫
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R563.9;R511.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 中英文對照表11-12
• 第1章 緒論12-18
• 1.1 香煙與COPD12-14
• 1.1.1 香煙煙霧（CSE）的危害12-14
• 1.1.2 香煙煙霧造成機體損傷的機制14
• 1.2 呼吸道病毒與COPD14-16
• 1.2.1 鼻病毒14
• 1.2.2 呼吸道合胞病毒14-15
• 1.2.3 人類皰疹病毒15
• 1.2.4 人類偏肺病毒15
• 1.2.5 流行性感冒病毒15-16
• 1.3 COPD誘導(dǎo)的炎癥細胞因子16-18
• 1.3.1 白細胞介素 616
• 1.3.2 白細胞介素 816-17
• 1.3.3 腫瘤壞死因子α17
• 1.3.4 白細胞介素1β17-18
• 第2章 甲型流感病毒感染對香煙煙霧所致慢性阻塞性肺疾病炎癥反應(yīng)的影響18-32
• 2.1 實驗材料18-19
• 2.1.1 實驗細胞、動物和病毒18
• 2.1.2 主要試劑18-19
• 2.1.3 主要儀器19
• 2.2 實驗方法19-23
• 2.2.1 體外實驗19-21
• 2.2.2 體內(nèi)實驗21-23
• 2.3 實驗結(jié)果23-32
• 2.3.1 體外實驗結(jié)果23-24
• 2.3.2 體內(nèi)實驗結(jié)果24-32
• 第3章 甲型流感病毒對香煙煙霧所致慢性阻塞性肺疾病炎癥反應(yīng)的機制研究32-40
• 3.1 實驗材料32
• 3.1.1 主要試劑32
• 3.1.2 主要儀器32
• 3.2 實驗方法32-35
• 3.2.1 RT-PCR檢測A549細胞中NLRP3和Caspase-1 mRNA表達量32-34
• 3.2.2 小鼠氣管和肺組織免疫組化34-35
• 3.3 實驗結(jié)果35-40
• 3.3.1 CSE和/或流感病毒對A549細胞的NLRP3和Caspase-1mRNA表達影響35-36
• 3.3.2 小鼠氣管NLRP3和Caspase-1 蛋白的表達量36-37
• 3.3.3 小鼠肺組織NLRP3和Caspase-1 蛋白的表達量37-40
• 第4章 討論40-43
• 第5章 結(jié)論43-44
• 參考文獻44-48
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果48-49
• 致謝49

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：甲型流感病毒感染對香煙煙霧所致慢性阻塞性肺疾病炎癥反應(yīng)的影響及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：405595