本文關鍵詞：甲型流感病毒感染對香煙煙霧所致慢性阻塞性肺疾病炎癥反應的影響及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一種以持續(xù)性氣道炎癥和氣流受限為特征的慢性肺部疾病,由于該病具有流行性廣和高致死率等特點,其發(fā)病機制已成為近年來研究的熱點。香煙煙霧(Cigarette smoke extract,CSE)是COPD發(fā)生的主要誘因,研究表明,COPD人群中70%為長期吸煙者,吸煙人群中有20%可發(fā)展為COPD,但CSE誘發(fā)COPD的機制尚未明確。目前認為,CSE引起肺部炎癥反應表現(xiàn)為巨噬細胞和中性粒細胞等炎癥細胞大量聚集,支氣管和肺黏膜分泌多種炎癥細胞因子和趨化因子,進而引起機體全身性炎癥反應,造成對心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的損傷,而COPD急性發(fā)作(Acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)是導致COPD患者住院率和死亡率居高不下的主要因素。鼻病毒、流感病毒和呼吸道合胞病毒等呼吸道病毒感染是AECOPD的主要誘導因素,其中流感病毒感染近年呈上升趨勢。隨著對固有免疫應答的認識不斷加深,流感病毒感染誘發(fā)AECOPD很有可能是其影響了機體的固有免疫應答,從而使COPD的炎癥反應加重造成的。由此可見,以固有免疫應答為對象,研究流感病毒感染COPD誘發(fā)的炎癥反應及其機制具有切實的意義。本研究主要分為體內和體外兩部分實驗進行。體外實驗首先采用CSE暴露法建立COPD細胞模型,以MTT法測定CSE對人肺癌上皮細胞系A549的半數(shù)抑制濃度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)。具體實驗分為正常對照組(細胞培養(yǎng)液),煙霧組(CSE),病毒組(100TCID50),病毒-煙霧混合組(CSE+100TCID50)。各實驗組造模后,用ELISA法分別測定細胞上清液中炎癥細胞因子IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α的表達量。提取A549細胞總RNA,用實時定量PCR法檢測各組細胞中核苷酸結合寡聚化結構域樣受體蛋白3(Nucleotide binding ligomerization domain receptor protein 3,NLRP3)和半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)m RNA的相對表達量。體內實驗采用被動吸煙法建立COPD小鼠模型。具體實驗分為正常對照組(正常飼養(yǎng)),煙霧組(煙熏),病毒組(100TCID50),病毒-煙霧混合組(煙熏+100TCID50)。造模結束后取小鼠氣管和肺組織,進行HE染色和AB-PAS染色,并用免疫組化法測定NLRP3和Caspase-1蛋白的表達量;取小鼠肺組織進行勻漿,用ELISA法測定炎癥細胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α的相對表達量。結果顯示,CSE對A549細胞的IC50為20%。體內實驗和體外實驗中,與正常對照組相比,煙霧組炎癥細胞因子IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α的表達量顯著升高(P0.05,P0.01);與煙霧組相比,病毒-煙霧混合組炎癥細胞因子IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α的表達量顯著升高(P0.05,P0.01)。實驗組(煙霧組、病毒組、病毒-煙霧混合組)小鼠氣管和肺組織HE染色和AB-PAS染色結果符合臨床COPD病理改變,煙霧組和病毒組小鼠氣管上皮細胞出現(xiàn)脫落、壞死,杯狀細胞增加,肺組織和氣管粘膜下層出現(xiàn)炎癥細胞浸潤,肺組織結構不完整;病毒-煙霧混合組小鼠氣管上皮細胞大量脫落,杯狀細胞顯著增加,肺組織和氣管粘膜下層出現(xiàn)大量炎癥細胞浸潤,肺組織結構嚴重破壞。A549細胞和小鼠肺組織NLRP3和Caspase-1蛋白/m RNA檢測結果顯示,煙霧組沒有NLRP3和Caspase-1蛋白/m RNA的顯著增加(P0.05),與煙霧組和病毒組相比,病毒-煙霧混合組NLRP3和Caspase-1蛋白/m RNA均有顯著升高(P0.01)。綜上,CSE通過激活了IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α等固有免疫分子,使肺上皮細胞產(chǎn)生了炎癥反應,而甲型流感病毒感染通過調控NLRP3和Caspase-1的表達,進而進一步加重了氣道炎癥反應。
【關鍵詞】：香煙煙霧 慢性阻塞性肺疾病 炎癥 甲型流感病毒 固有免疫
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R563.9;R511.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 中英文對照表11-12
• 第1章 緒論12-18
• 1.1 香煙與COPD12-14
• 1.1.1 香煙煙霧（CSE）的危害12-14
• 1.1.2 香煙煙霧造成機體損傷的機制14
• 1.2 呼吸道病毒與COPD14-16
• 1.2.1 鼻病毒14
• 1.2.2 呼吸道合胞病毒14-15
• 1.2.3 人類皰疹病毒15
• 1.2.4 人類偏肺病毒15
• 1.2.5 流行性感冒病毒15-16
• 1.3 COPD誘導的炎癥細胞因子16-18
• 1.3.1 白細胞介素 616
• 1.3.2 白細胞介素 816-17
• 1.3.3 腫瘤壞死因子α17
• 1.3.4 白細胞介素1β17-18
• 第2章 甲型流感病毒感染對香煙煙霧所致慢性阻塞性肺疾病炎癥反應的影響18-32
• 2.1 實驗材料18-19
• 2.1.1 實驗細胞、動物和病毒18
• 2.1.2 主要試劑18-19
• 2.1.3 主要儀器19
• 2.2 實驗方法19-23
• 2.2.1 體外實驗19-21
• 2.2.2 體內實驗21-23
• 2.3 實驗結果23-32
• 2.3.1 體外實驗結果23-24
• 2.3.2 體內實驗結果24-32
• 第3章 甲型流感病毒對香煙煙霧所致慢性阻塞性肺疾病炎癥反應的機制研究32-40
• 3.1 實驗材料32
• 3.1.1 主要試劑32
• 3.1.2 主要儀器32
• 3.2 實驗方法32-35
• 3.2.1 RT-PCR檢測A549細胞中NLRP3和Caspase-1 mRNA表達量32-34
• 3.2.2 小鼠氣管和肺組織免疫組化34-35
• 3.3 實驗結果35-40
• 3.3.1 CSE和/或流感病毒對A549細胞的NLRP3和Caspase-1mRNA表達影響35-36
• 3.3.2 小鼠氣管NLRP3和Caspase-1 蛋白的表達量36-37
• 3.3.3 小鼠肺組織NLRP3和Caspase-1 蛋白的表達量37-40
• 第4章 討論40-43
• 第5章 結論43-44
• 參考文獻44-48
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果48-49
• 致謝49

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：甲型流感病毒感染對香煙煙霧所致慢性阻塞性肺疾病炎癥反應的影響及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：405595