本文關(guān)鍵詞：miR-146a在結(jié)核分枝桿菌感染肺泡Ⅱ型細(xì)胞中對(duì)TLRs信號(hào)通路的免疫調(diào)控作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌(Tuberculosis, TB)感染引起的一種慢性消耗性人獸共患病,全世界約有20億人感染該病,其中10%有可能發(fā)展為活動(dòng)性肺結(jié)核。結(jié)核分枝桿菌的致病機(jī)理十分復(fù)雜,尤其是近年來(lái)耐藥和耐多藥結(jié)核菌的出現(xiàn),給臨床治療結(jié)核病帶來(lái)很大的困難,特別是和其他疾病混合感染(如HIV)增加了患者的死亡率。雖然卡介苗目前是預(yù)防結(jié)核病的唯一手段,但卡介苗的保護(hù)率很低,而且僅對(duì)兒童和未成年人有效,對(duì)成年人幾乎沒(méi)有保護(hù)作用。因此,尋求新的有效途徑來(lái)防治結(jié)核病顯得尤為重要。近年來(lái)發(fā)現(xiàn),肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(AECⅡ)作為肺臟的“物理屏障”,同肺泡巨噬細(xì)胞一起在機(jī)體對(duì)抗Mtb感染中發(fā)揮著重要的免疫調(diào)控功能。而miRNA是作為一種內(nèi)源性具有調(diào)控功能的非編碼RNA,在機(jī)體的發(fā)育、生理和病理發(fā)生過(guò)程中有著重要的調(diào)控功能。miRNA可以影響宿主抵抗Mtb的感染過(guò)程,其異常表達(dá)也與結(jié)核病的發(fā)生密切相關(guān)。眾所周知,Toll樣受體(Toll-like receptors.TLRs)作為先天免疫中的模式識(shí)別受體(PRR),是連接先天免疫和獲得性免疫的“橋梁”,能夠監(jiān)視與識(shí)別各種不同的病原相關(guān)分子模式(PAMP),是機(jī)體抵抗病原菌(如Mtb)感染的“第一道屏障”。因此,為了揭示niRNA在肺臟AECⅡ細(xì)胞抗Mtb感染中與TLRs信號(hào)通路間的相互調(diào)控作用,本研究以AECⅡ細(xì)胞為細(xì)胞模型,建立結(jié)核分枝桿菌國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株H37Rv和減毒株BCG細(xì)胞-細(xì)菌互作模型,在前期測(cè)定miRNA差異表達(dá)譜的基礎(chǔ)上,分析了Mtb感染前后AECⅡ細(xì)胞中TLRs信號(hào)通路的變化,以及niR-29a, miR-146a和miR-200c的表達(dá)情況,并進(jìn)一步分析了在AECⅡ細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-146a對(duì)TLRs信號(hào)通路的影響,獲得了一下結(jié)果：(1)利用H37Rv和BCG分別感染AECⅡ細(xì)胞株A549,分析在感染6h,12 h和24 h時(shí),檢測(cè)TLRs信號(hào)通路、促炎細(xì)胞因子與miR-29a、miR-146a和miR-200c的表達(dá)變化。試驗(yàn)結(jié)果表明,A549細(xì)胞中TLR2/4、NFκB、MyD88的mRNA和蛋白表達(dá)水平在感染6h時(shí)顯著升高,且H37Rv感染組高于BCG感染組；而促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1α、IL-6、IL-8和IL-12 α的mRNA表達(dá)水平隨著感染時(shí)間升高,且H37Rv感染組TNF-α、IL-1α、IL-6和IL-8的表達(dá)顯著高于BCG感染組,IL-12a差異不顯著,而在H37感然組中IL-6在24h顯著下降。miR-146a隨著感染時(shí)間表達(dá)顯著升高,且H37Rv高于BCG; miR-29a在感染6h時(shí)表達(dá)量H37Rv顯著高于BCG,但在12h和24h時(shí),BCG感染組miR-29a表達(dá)量較6h時(shí)顯著升高,而H37Rv感染組miR-29a表達(dá)量顯著下調(diào),但這兩個(gè)感染組12h與24h時(shí)間點(diǎn)的組內(nèi)差異不顯著；miR-200c在BCG感染組在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)先降低后升高,表現(xiàn)為感染后表達(dá)抑制,而在H37Rv感染組內(nèi)表達(dá)差異不顯著,且表達(dá)量低于BCG感染組6h和24h的相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)。這為進(jìn)一步分析在Mtb感染肺臟上皮Ⅱ型細(xì)胞中niR-146a與TLRs信號(hào)通路的免疫應(yīng)答機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。(2)基于miR-146a作為TLRs信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控因子,其表達(dá)量在Mtb感染AECⅡ細(xì)胞中呈上調(diào)趨勢(shì)的試驗(yàn)結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建并包裝過(guò)表達(dá)niR-146a腺病毒載體,并分析了A549細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-146a時(shí)在Mtb感染中,miR-146a對(duì)TLRs信號(hào)通路及細(xì)胞因子的表達(dá)調(diào)控作用,該試驗(yàn)結(jié)果表明,構(gòu)建的過(guò)表達(dá)miR-146a腺病毒載體能夠在293T細(xì)胞和A549細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-146a;當(dāng)過(guò)表達(dá)miR-146a時(shí),在BCG感染組中TLR2的表達(dá)表現(xiàn)為感染后顯著抑制,而H37Rv感染組中TLR2表達(dá)差異不顯著；TLR4在BCG和H37Rv感染組中均表現(xiàn)為顯著下調(diào),這有可能是在AEC Ⅱ細(xì)胞中,TLR.2是以同源二聚體形式識(shí)別BCG,以TLR2/TLR4異源二聚體形式識(shí)別H37Rv。過(guò)表達(dá)miR-146a時(shí),在BCG和H37Rv感染組中對(duì)TLR信號(hào)通路的下游分子MyD88、TRAF6、NF-κB和促炎細(xì)胞因子TNF-α、EL-6的表達(dá)均表現(xiàn)為感染后的抑制作用,而IL-8表達(dá)影響不明顯。綜上所述,在AECⅡ細(xì)胞抗Mtb感染的過(guò)程中,H37Rv對(duì)TLRs信號(hào)通路的活化和引起的炎性反應(yīng)強(qiáng)于BCG,且miR-146a負(fù)調(diào)控TLRs信號(hào)通路中MyD88、TRAF、NF-κB和炎癥因子IL-6等來(lái)參與調(diào)控AECⅡ細(xì)胞對(duì)Mtb的感染過(guò)程,這為進(jìn)一步研究miRNA在AECⅡ細(xì)胞感染Mtb中的免疫調(diào)控作用豐富了材料。
【關(guān)鍵詞】：肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 Toll樣受體信號(hào)通路 結(jié)核分枝桿菌 miRNA
【學(xué)位授予單位】：寧夏大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R52
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 中英文縮略表8-9
• 第一章 文獻(xiàn)綜述9-20
• 1.1 結(jié)核病及結(jié)核菌的介紹9
• 1.2 Toll樣受體家族9-13
• 1.3 miRNA13-18
• 1.4 肺臟基本結(jié)構(gòu)和肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞18-19
• 1.5 研究意義19-20
• 第二章 結(jié)核分枝桿菌強(qiáng)毒株和弱毒株感染A549細(xì)胞對(duì)TLRs信號(hào)通路和miRNA的表達(dá)的影響20-36
• 1. 材料20-24
• 2. 方法24-32
• 3. 結(jié)果32-34
• 4. 討論與小結(jié)34-36
• 第三章 高表達(dá)miR-146a腺病毒的包裝、驗(yàn)證和其在Mtb感染中的調(diào)控作用的研究36-56
• 1. 材料36-38
• 2. 方法38-49
• 3. 結(jié)果49-54
• 4. 討論與小結(jié)54-56
• 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-64
• 附錄64-65
• 致謝65-66
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷66-67
• 研究生期間發(fā)表的論文67

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：miR-146a在結(jié)核分枝桿菌感染肺泡Ⅱ型細(xì)胞中對(duì)TLRs信號(hào)通路的免疫調(diào)控作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：401642