本文關(guān)鍵詞：基于基因工程抗原的華支睪吸蟲(chóng)免疫學(xué)診斷方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：華支睪吸蟲(chóng)(Clonorchis sinensis)是一種危害嚴(yán)重的淡水魚(yú)源性人獸共患寄生蟲(chóng)病,人或哺乳動(dòng)物由于生食或半生食淡水魚(yú)蝦而引起感染。長(zhǎng)期感染能夠誘發(fā)膽結(jié)石、膽管炎、膽囊炎、膽管癌和肝癌等疾病。在感染華支睪吸蟲(chóng)囊蚴4周后成蟲(chóng)發(fā)育成熟才開(kāi)始產(chǎn)卵并隨糞便排出,在這期間如果糞便檢查沒(méi)有發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)卵則導(dǎo)致誤診,延誤疾病的治療,可能導(dǎo)致嚴(yán)重的后果。因此,診斷華支睪吸蟲(chóng)病,對(duì)于預(yù)防該病具有重要意義。本研究首先在華支睪吸蟲(chóng)病流行區(qū)應(yīng)用糞便檢查法(改良加藤厚涂片法)和已發(fā)表的PCR檢測(cè)方法雙重鑒定當(dāng)?shù)鼐用窦S便樣本以獲得標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清。糞便檢查1745人,其中513人糞便中具有蟲(chóng)卵;然后提取513人糞便樣本中蟲(chóng)卵的DNA進(jìn)行PCR鑒定,陽(yáng)性為113人,共采取陽(yáng)性血清112份。本研究通過(guò)雙重鑒定,以減少獲得假陽(yáng)性血清,由此確定獲得的112份血清為華支睪吸蟲(chóng)病標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清,用此血清檢驗(yàn)間接ELISA診斷方法的敏感性。免疫學(xué)診斷方法在疾病診斷方面飛速發(fā)展,本研究擬應(yīng)用免疫學(xué)原理建立華支睪吸蟲(chóng)病診斷方法。目前ELISA診斷方法已逐漸應(yīng)用到華支睪吸蟲(chóng)病的診斷當(dāng)中,應(yīng)用這種方法能夠盡早對(duì)疾病進(jìn)行診斷,以免延誤疾病的治療,能夠解決感染早期無(wú)法診斷和蟲(chóng)卵產(chǎn)生較少時(shí)期的盲區(qū)問(wèn)題。間接ELISA診斷方法所使用的診斷抗原多為粗抗原或分泌排泄物(ES)抗原,這些抗原雖然敏感性尚可但存在的共同弊端是特異性差,除在健康人存在較高的假陽(yáng)性外,同其他寄生蟲(chóng)如血吸蟲(chóng)、后睪吸蟲(chóng)、并殖吸蟲(chóng)等均存在較強(qiáng)的交叉反應(yīng)。目前基因工程抗原成為診斷抗原研究的熱點(diǎn),其在保持高敏感的基礎(chǔ)上,同時(shí)具有高特異性,能夠解決交叉反應(yīng)問(wèn)題。因此,尋找高特異性、高敏感性的診斷抗原成為建立免疫學(xué)診斷方法的關(guān)鍵。為解決以上問(wèn)題,本實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)華支睪吸蟲(chóng)成蟲(chóng)的c DNA表達(dá)文庫(kù)進(jìn)行免疫學(xué)篩選,獲得3個(gè)強(qiáng)反應(yīng)原性抗原,經(jīng)測(cè)序發(fā)現(xiàn)三個(gè)抗原均為高度串聯(lián)重復(fù)序列,并且都有一個(gè)相同的末端,因此,本實(shí)驗(yàn)根據(jù)三個(gè)強(qiáng)反應(yīng)原性抗原的串聯(lián)重復(fù)序列和共同末端獲得四對(duì)抗原基因,分別為Cs G1、Cs G2、Cs G6、Cs Gend,首先,對(duì)四種抗原基因進(jìn)行基因合成,然后對(duì)四種抗原進(jìn)行原核表達(dá),成功制備了表達(dá)載體p ET-28a-Cs G1、p ET-28a-Cs G2、p ET-28a-Cs G6、p ET-28a-Cs Gend,獲得四種基因重組抗原,純度達(dá)到95%,western blot結(jié)果顯示四種重組蛋白能夠被陽(yáng)性血清特異性識(shí)別。利用四種重組抗原分別建立華支睪吸蟲(chóng)病間接ELISA診斷方法,分析四種抗原基因的抗原性。四種重組抗原p ET-28a-Cs G1、p ET-28a-Cs G2、p ET-28a-Cs G6、p ET-28a-Cs Gend敏感性分別為91.1%(102/112)、86.6%(97/112)、74.1%(83/112)、49.1%(55/112),四種重組抗原同時(shí)包被進(jìn)行檢測(cè)敏感性為83.9%(94/112);特異性均為100%;篩庫(kù)獲得的三種強(qiáng)反應(yīng)原性基因共同末端Cs Gend抗原性最弱;Cs G1抗原性最強(qiáng),為理想的診斷抗原,以此為抗原建立華支睪吸蟲(chóng)病間接ELISA診斷方法,能夠解決感染早期無(wú)法診斷的問(wèn)題,有利于華支睪吸蟲(chóng)病的預(yù)防和控制。
【關(guān)鍵詞】：華支睪吸蟲(chóng) 原核表達(dá) 重組抗原 ELISA
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R446.6;R532.23
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文縮寫(xiě)詞表9-11
• 前言11-13
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述13-26
• 第一章 華支睪吸蟲(chóng)及華支睪吸蟲(chóng)病研究進(jìn)展13-19
• 1.1 華支睪吸蟲(chóng)病13-14
• 1.2 流行病學(xué)14-15
• 1.3 臨床表現(xiàn)和誘發(fā)癥15-16
• 1.4 基因組學(xué)和蛋白組學(xué)16-19
• 第二章 華支睪吸蟲(chóng)診斷方法的研究進(jìn)展19-26
• 2.1 糞便檢查法19
• 2.2 PCR檢測(cè)方法19-21
• 2.3 免疫學(xué)檢測(cè)方法21-22
• 2.4 華支睪吸蟲(chóng)病的診斷抗原22-26
• 第二篇 研究?jī)?nèi)容26-64
• 第一章 華支睪吸蟲(chóng)Cs G1、Cs G2、Cs G6和Cs Gend基因的原核表達(dá)與純化26-43
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料27-28
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法28-38
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-41
• 1.4 討論41-42
• 1.5 小結(jié)42-43
• 第二章 華支睪吸蟲(chóng)患者陽(yáng)性血清的獲得43-50
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料43-44
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法44-46
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-48
• 2.4 討論48-49
• 2.5 小結(jié)49-50
• 第三章 華支睪吸蟲(chóng)ELISA診斷方法的建立50-64
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料51
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法51-55
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果55-61
• 3.4 討論61-63
• 3.5 小結(jié)63-64
• 結(jié)論64-65
• 參考文獻(xiàn)65-73
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介73-74
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間取得的科研成果74-75
• 致謝75

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 唐藝芝;郝玉花;孫青松;彭鵬;吳秀萍;王學(xué)林;劉明遠(yuǎn);;吉林地區(qū)華支睪吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵的鑒定及PCR檢測(cè)方法的建立[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年07期

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 葉春艷;華支睪吸蟲(chóng)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及其免疫學(xué)篩選和EST測(cè)序[D];吉林大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：基于基因工程抗原的華支睪吸蟲(chóng)免疫學(xué)診斷方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：393293