在由農(nóng)桿菌介導的葉盤法轉(zhuǎn)化煙草的研究中,將含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌過夜培養(yǎng)后按1∶100接種于新鮮的LB培養(yǎng)液中培養(yǎng)6h至OD600≈0.6時,取菌液經(jīng)梯度稀釋后分別對大小約0.5cm2的煙草葉片進行不同時間浸染。結(jié)果表明,用經(jīng)20倍稀釋后的菌液浸染的煙草葉片其轉(zhuǎn)化率達97%以上,且不同時間浸染的處理間無顯著差異,培養(yǎng)基中激素濃度以6-BA 1.5mg/L IAA 0.5mg/L為宜。

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【文章目錄】：
1 引言
    1.1 腎綜合征出血熱 (HFRS) 的研究意義及其進展
    1.2 植物轉(zhuǎn)化的影響因素
        1.2.1 菌液濃度和浸染時間對植物轉(zhuǎn)化的影響
        1.2.2 共培養(yǎng)對植物轉(zhuǎn)化的影響
        1.2.3 乙酰丁香酮 (AS) 對植物轉(zhuǎn)化的影響
        1.2.4預培養(yǎng)對植物轉(zhuǎn)化的影響
        1.2.5其他影響因素
    1.3 擬開展研究的內(nèi)容及方法
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌種
        2.1.3 質(zhì)粒
    2.2 實驗儀器
    2.3 實驗試劑
        2.3.1 質(zhì)粒提取試劑
        2.3.2 抗生素:利福霉素 (rif)
        2.3.3 轉(zhuǎn)化液
        2.3.4培養(yǎng)基
    2.4 實驗方法
        2.4.1 制備農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化子及鑒定
            2.4.1. 1 農(nóng)桿菌EHA105的培養(yǎng)
            2.4.1. 2 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞的制備
            2.4.1. 3 重組質(zhì)粒向農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化 (凍融法)
3 實驗結(jié)果
    3.1 農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化提取及鑒定
    3.2 農(nóng)桿菌介導的煙草葉片轉(zhuǎn)化
        3.2.1 菌懸浮液濃度及浸染時間對出愈率的影響
        3.2.2 共培養(yǎng)時間對出愈率的影響
        3.2.3 激素濃度對出愈的影響
4 討論



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