本文關(guān)鍵詞：抑癌基因Arid2對HBV病毒復制的調(diào)控及分子機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：乙型病毒性肝炎(Hepatitis B virus,HBV)是一種嚴重危害人類健康和生命的傳染性疾病,每年大約有100萬人死于HBV相關(guān)性疾病。哺乳動物酵母交換型轉(zhuǎn)換/蔗糖不發(fā)酵復合物(Yeast mating-type switching/sucrose non-fermenting, SWI/SNF)是一種進化保守的多亞基染色質(zhì)重塑復合物,其核心亞單位BRG1或BRM具有ATP酶活性。SWI/SNF復合物利用ATP水解所釋放的能量動員核小體改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)從而調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄。人類的SWI/SNF復合物分兩個亞型BAF(BRG1/hBRM-associated factors)和PBAF (Polybromo-associatedBAF),兩者僅有幾個組成亞基不同。Arid2基因編碼的BAF200是新近發(fā)現(xiàn)的SWI/SNF復合物核心亞單位PBAF中的一種特異性亞基。研究表明,病毒復制的過程同樣需要核染色質(zhì)重塑蛋白的參與,而作為PBAF中的一種特異性亞基,Arid2對病毒的復制也具有重要的調(diào)控作用,Easley等發(fā)現(xiàn)Arid2能夠影響人類免疫缺陷病毒長末端重復序列(The human immunodeficiency virus type 1 long terminal repeat,HIV LTR)的轉(zhuǎn)錄活性從而調(diào)控病毒的復制。但是Arid2對HBV感染細胞中病毒復制的調(diào)控作用還未見相關(guān)報道,本實驗旨在HBV穩(wěn)定復制的細胞系(HepG2-HBV1.1和HepG2.2.15)中觀察Arid2能否調(diào)控HBV的復制,并進一步探尋Arid2調(diào)控HBV復制的相關(guān)分子機制。方法：1)在HBV復制的穩(wěn)定細胞系中通過Western blot和Southern blot檢測Arid2表達水平和HBV復制水平的相關(guān)性。2)在HBV穩(wěn)定復制的肝癌細胞系(HepG2-HBV1.1和HepG2.2.15)中,通過Southern blot、 Western blot、 qRT-PCR和ELISA法觀察沉默或過表達Arid2后HBV復制水平的變化。3)通過RT-PCR(?)qRT-PCR篩選沉默或過表達Arid2后可能影響HBV復制的轉(zhuǎn)錄因子,并進一步通過免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)、染色質(zhì)免疫共沉淀實驗(chromatin immunoprecipitation,ChIP)深入研究Arid2調(diào)控HBV復制的分子機制。結(jié)果：Western blot 和Southern blot結(jié)果表明,在HBV穩(wěn)定復制的肝癌細胞系(HepG2.2.15.HepG2-HBV1.1和HepAD38)中,HBV的復制水平和Arid2基因的表達水平呈正相關(guān)。qRT-PCR和Southernblot結(jié)果證實：沉默Arid2基因的表達后,細胞內(nèi)的HBV DNA拷貝量、pgRNA和HBcAg的表達量比對照組明顯降低(P0.05);ELISA方法檢測到siArid2組細胞上清中HBeAg表達降低(P0.05),但上清中HBsAg的表達量與對照組無明顯差異(P0.05)。通過RT-PCR篩選與HBV復制相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子,我們發(fā)現(xiàn)沉默Arid2基因的表達后,細胞轉(zhuǎn)錄因子PGC-1α的表達明顯下調(diào)。ChIP實驗進一步表明,轉(zhuǎn)錄因子PGC-1α能夠與HBV增強子結(jié)合,且主要與HBV Enhancer Ⅱ結(jié)合為主,沉默Arid2后轉(zhuǎn)錄因子P GC-1α與HBV增強子的結(jié)合水平明顯下降。Co-IP實驗表明,Arid2蛋白不能與轉(zhuǎn)錄因子PGC-1α直接結(jié)合。反之,在過表達Arid2的細胞模型中,實驗組細胞內(nèi)的HBV DNA拷貝量、pgRNA和HBcAg的表達量與細胞上清中的]HBeAg表達量比對照組明顯增加,同時,細胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子PGC-1α的表達量也明顯增加。ChIP實驗證實過表達Arid2后PGC-1α與HBV增強子的結(jié)合水平明顯增加。結(jié)論：在HBV復制狀態(tài)下,Arid2的表達水平與HBV復制水平呈正相關(guān)。Arid2主要通過調(diào)控PGC-1 α的表達,并增強PGC-1α與HBV轉(zhuǎn)錄調(diào)控核心啟動子區(qū)E nhancer Ⅱ的結(jié)合來調(diào)控HBV的復制與轉(zhuǎn)錄。
【關(guān)鍵詞】：HBV Arid2 HBV復制 轉(zhuǎn)錄因子 PGC-1α
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R512.62
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分 Arid2調(diào)控HBV轉(zhuǎn)錄與復制的體外實驗14-29
• 1 材料與方法14-17
• 2 結(jié)果17-26
• 3 討論26-29
• 第二部分 Arid2促進HBV復制的機制研究29-40
• 1 材料與方法29-32
• 2 結(jié)果32-38
• 3 討論38-40
• 參考文獻40-43
• 全文總結(jié)43-45
• 文獻綜述45-53
• 參考文獻50-53
• 致謝53-54
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文54

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