背景:原發(fā)性肝癌(Hepatic carcinoma,HCC)是當(dāng)今最常見的惡性腫瘤之一,其惡性程度高,治療效果不理想,死亡率居于惡性腫瘤第三位。我國是肝癌的高發(fā)區(qū),全世界每年新發(fā)的肝癌約一半發(fā)生在中國,而在中國診斷的肝癌患者中,大部分為乙肝相關(guān)性肝癌,中國每年大約有30萬人因肝癌死亡,對人民健康和國民經(jīng)濟(jì)的影響不容小覷。目前肝癌的治療方法主要是綜合治療,包括手術(shù)切除,介入治療,消融治療,放療,化療,抗病毒治療以及近幾年出現(xiàn)的靶向治療及免疫治療,但肝癌患者總體5年生存率約為12%,即使外科手術(shù)切除,患者的5年生存率通常低于38%-61%,近年來已無明顯改善,肝癌的治療已達(dá)瓶頸期,我們必須從肝癌的發(fā)病機(jī)制入手重新審視目前的肝癌治療方案,因此,深入研究肝癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,尋找新的標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)對肝癌的診斷與治療有著非常重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。Hedgehog(Hh)信號通路在HCC的發(fā)展過程中具有復(fù)雜的作用,并與多種癌癥特征相關(guān)。新近發(fā)現(xiàn)阻斷Hh信號通路延緩乙肝病毒相關(guān)蛋白Hbx誘發(fā)的肝細(xì)胞癌變。近期有研究報道:人乙肝相關(guān)性肝癌細(xì)胞中Hbx蛋白的表達(dá)與Hh通路激活相關(guān);并通過體內(nèi)、體外...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 前言
    1.1 概述
第2章 Hbx激活Hedgehog信號通路
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系及質(zhì)粒
        2.1.2 試劑與耗材
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 主要試劑配制
        2.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.3 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
        2.3.4 細(xì)胞總RNA提取
        2.3.5 逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)
        2.3.6 Real-time PCR
        2.3.7 細(xì)胞蛋白的提取及定量
        2.3.8 Western Blot實(shí)驗(yàn)
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 高表達(dá)Hbx蛋白激活Hh信號通路
        2.4.2 過表達(dá)Hbx使 Gli2 基因RNA水平表達(dá)增加,感染HBV小鼠的肝臟Gli2 RNA水平表達(dá)增加
第3章 Hbx與 Hh信號通路關(guān)鍵靶基因Gli2 的間相互作用
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞系及質(zhì)粒
        3.1.2 試劑與耗材
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 試劑配置
        3.2.2 真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.3 質(zhì)粒DNA的提取
        3.2.4 蛋白質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
        3.2.5 熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 Hbx與 Gli2 有直接相互作用
        3.3.2 Hbx為 Gli2 上游靶基因,可上調(diào)Gli2 表達(dá)
第4章 過表達(dá)Hbx促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖侵襲遷移
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 細(xì)胞系及質(zhì)粒
        4.1.2 主要耗材與試劑
        4.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 試劑配置
        4.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.3 慢病毒技術(shù)構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)Hbx細(xì)胞系(Huh7)
        4.2.4 細(xì)胞增殖曲線實(shí)驗(yàn)
        4.2.5 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
        4.2.6 EdU細(xì)胞增殖檢測實(shí)驗(yàn)
        4.2.7 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        4.2.8 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 Hbx提高體外肝癌細(xì)胞的增殖能力
        4.3.2 Hbx促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲和遷移
第5章 結(jié)論與討論
    5.1 結(jié)論
    5.2 討論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3869971