目的建立改良單疊氮丙啶(propidium monoazide xx,PMAxx)-熒光定量PCR(qPCR)鑒定MTB活菌和熱滅活菌的方法,并探討PMAxx-qPCR進行抗結(jié)核藥物體外活性檢測的價值。方法通過活菌和熱滅活菌優(yōu)化PMAxx針對MTB菌株H37Rv的預(yù)處理條件,包括曝光時間、暗孵育時間、PMAxx濃度,以及靶標DNA片段長度等。通過繪制量效曲線和建立循環(huán)閾值(Cq)與菌負荷的標準曲線,應(yīng)用PMAxx-qPCR法計算測定異煙肼(INH)、利福平(RFP)的體外抗菌活性,評價檢測敏感度,并分別與微孔板Alamar Blue(MABA)法和菌落形成單位(CFU)計數(shù)法進行比較,菌落計數(shù)采用獨立樣本t檢驗進行統(tǒng)計分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果當細菌負荷設(shè)定為10⁷ CFU/ml時,在PMAxx濃度為10μmol/L、暗孵育10 min后曝光15 min可有效鑒別活菌、死菌(△Cq_死-活=6.772±0.453),且使用>200 bp靶標片段可更有效地反映活菌、死菌的差異。PMAxx-qPCR方法在藥物作用后3d...

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【文章目錄】：
資料和方法
    一、結(jié)核分枝桿菌標準株
    二、主要試劑和儀器
        1.試劑:
        2.儀器:
    三、實驗方法
        (一)菌液制備
        (二)PMAxx處理條件優(yōu)化
        (三)PMAxx處理的相關(guān)影響因素
        (四)抗結(jié)核藥物活性檢測
    四、統(tǒng)計學處理
結(jié)果
討論



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