本文關(guān)鍵詞：流感病毒感染對腸道的影響及其致腹瀉原因初探，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:臨床發(fā)現(xiàn)部分流感病毒感染患者有明顯的腹瀉癥狀,但其機制不明。本實驗通過建立流感感染模型、全身炎癥反應(yīng)模型、病毒抗原進(jìn)入腸道模型以及腸道菌群失調(diào)模型四種不同的實驗小鼠模型,分別檢測各組模型小鼠腸道菌群和腸道炎癥細(xì)胞的變化情況,以期分析流感病毒感染引起腹瀉的直接原因。通過檢測外周免疫器官和肺部不同炎癥細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá),探索引起肺部病變的流感病毒通過何種途徑使腸道菌群和腸道炎癥發(fā)生變化導(dǎo)致腹瀉的發(fā)生,期望為流感患者、尤其對腸道菌群和免疫系統(tǒng)尚未完全發(fā)育成熟的兒童流感患者治療方案的選擇提供幫助。材料和方法:1.用雞胚尿囊腔接種法擴增流感病毒FM1株,并測定其血凝效價。2.建立小鼠流感感染模型,測定病毒感染小鼠的LD50,確定最佳病毒感染滴度。3.全身炎癥反應(yīng)(CD3抗體尾靜脈注射)和流感病毒抗原進(jìn)入腸道(病毒抗原腹膜腔注射)模型的建立,觀察小鼠有無明顯的除實驗觀察指標(biāo)外的異常反應(yīng)。4.建立腸道菌群失調(diào)模型,確定使用合適的抗生素種類、劑量及給予方式。5.對比觀察各組小鼠各項體征的變化情況。6.通過小鼠糞便中細(xì)菌培養(yǎng)計數(shù),對比觀察各組小鼠腸道菌群變化情況。7.RT-PCR法檢測各組小鼠外周免疫器官、肺部及腸道組織中Th1、Th17和Treg細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)情況。8.RT-PCR和ELISA方法檢測腸道組織中IL-17的表達(dá)情況和合成數(shù)量。結(jié)果:1.用雞胚尿囊腔接種法擴增流感病毒FM1株成功,測定擴增后尿囊液的血凝效價為1:640。2.實驗測得昆明種小鼠感染流感病毒FM1株的LD50=5×10-5.56,并確定以20%的LD50為感染濃度。3.經(jīng)小鼠尾靜脈注射抗-小鼠CD3抗體(全身炎癥反應(yīng)模型)或腹膜腔注射流感病毒疫苗(病毒抗原進(jìn)入腸道模型)后,小鼠均未出現(xiàn)明顯的除實驗觀察指標(biāo)外的異常反應(yīng)。4.通過對比甲硝銼、先鋒霉素及新霉素灌胃后小鼠腸道菌群的變化情況,最終確定使用30 mg/m L的新霉素灌胃以建立小鼠腸道菌群失調(diào)的模型。5.小鼠在感染流感病毒后出現(xiàn)體重明顯下降、毛發(fā)失去光澤、聳毛、蜷縮、食欲減退等體征變化。全身炎癥模型組也出現(xiàn)明顯的體重變化,但其他方面無明顯改變。6.檢測發(fā)現(xiàn),病毒感染組小鼠的腸桿菌和腸球菌相對正常對照組明顯增高,而乳桿菌和雙歧桿菌明顯降低;腸道組織中Th17細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)明顯升高,表明Th17細(xì)胞數(shù)量顯著增加。然而空白組小鼠的腸道菌群及Th17細(xì)胞數(shù)量無明顯改變,說明流感病毒感染引起了腸道菌群和腸道炎癥細(xì)胞數(shù)量的變化。7.通過RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),病毒感染組和全身炎癥反應(yīng)組模型小鼠外周免疫器官及肺部的Th1細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)明顯增高,Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)明顯降低。證明流感感染誘發(fā)了小鼠全身炎癥反應(yīng),繼而導(dǎo)致腸道局部炎癥和腸道菌群的變化。8.對腸道組織中IL-17的表達(dá)水平和IL-17含量的檢測表明,在病毒對照組和全身炎癥反應(yīng)組模型的小鼠腸道確實發(fā)生了以Th17增多的炎癥反應(yīng),進(jìn)一步證明流感通過引起全身的炎癥反應(yīng)而導(dǎo)致腸道的變化。結(jié)論:通過對比病毒感染組、CD3抗體組、病毒抗原入腸組以及腸道菌群失調(diào)組模型,分析腸道菌群和腸道局部免疫細(xì)胞的變化情況說明,流感病毒感染后主要通過引起腸道菌群和腸道炎癥細(xì)胞的變化而導(dǎo)致腹瀉的發(fā)生。分析對比各組小鼠肺部和外周免疫細(xì)胞的變化情況說明,流感感染后通過炎癥因子和炎癥細(xì)胞的遷移引起腸道局部的變化,而非病毒抗原遷移所致。另外,研究還證明CD3抗體用于模擬流感病毒感染引起全身炎癥反應(yīng)模型是可行的。
【關(guān)鍵詞】：流感病毒 腹瀉 全身炎癥反應(yīng) 局部炎癥反應(yīng) Th17 腸道菌群
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R511.7
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• Abstract6-12
• 1 前言12-22
• 1.1 流感病毒及感染12-14
• 1.1.1 流感病毒的危害及其基本結(jié)構(gòu)12-13
• 1.1.2 流感的流行病學(xué)及發(fā)病機制13-14
• 1.2 機體抗流感感染14-18
• 1.2.1 固有免疫14
• 1.2.2 適應(yīng)性免疫14-15
• 1.2.3 Th1/Th215-16
• 1.2.4 Th17/Treg16-17
• 1.2.5 T-bet、GATA-3、R0R-γ 和Foxp317
• 1.2.6 小結(jié)17-18
• 1.3 腸道菌群與腸道局部免疫18-19
• 1.3.1 腸道菌群的組成和基本功能18
• 1.3.2 腸道黏膜免疫系統(tǒng)的構(gòu)成及功能18-19
• 1.3.3 腸道菌群對免疫系統(tǒng)的影響19
• 1.3.4 腸道菌群與流感19
• 1.4 流感與腹瀉19-20
• 1.5 CD3抗體20-21
• 1.6 本實驗創(chuàng)新點21
• 1.7 技術(shù)路線21-22
• 2 實驗材料22-28
• 2.1 實驗儀器和設(shè)備22-23
• 2.2 主要材料23
• 2.2.1 流感病毒：23
• 2.2.2 實驗動物：23
• 2.2.3 流感病毒疫苗抗原：23
• 2.3 其它試劑與材料23-25
• 2.4 主要試劑配制25-27
• 2.4.1 革蘭染色液的配制25-26
• 2.4.2 PBS緩沖液的配制26
• 2.4.34%和 0.4%的甲醛溶液的配制26-27
• 2.4.4 TAE緩沖液的配制27
• 2.4.51%瓊脂糖凝膠的配制27
• 2.5 實驗用品的清潔和消毒27-28
• 3 實驗方法28-36
• 3.1 流感病毒雞胚擴增28
• 3.2 流感模型的建立28-29
• 3.3 實驗分組29
• 3.4 體重、體毛及生活狀態(tài)觀察29
• 3.5 腸道菌群分類、鑒別、計數(shù)29-31
• 3.5.1 標(biāo)本處理、接種、培養(yǎng)29-30
• 3.5.2 菌落革蘭氏染色、鑒別、計數(shù)30-31
• 3.6 病理切片的制備和染色31-32
• 3.6.1 組織固定與包埋31-32
• 3.6.2 HE染色32
• 3.7 RT-RCR檢測不同種類免疫細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子32-34
• 3.7.1 組織總RNA提取32-33
• 3.7.2 c DNA的合成33-34
• 3.7.3 實時熒光定量PCR反應(yīng)34
• 3.8 Elisa測定腸道中IL-17含量34-35
• 3.8.1 實驗前準(zhǔn)備34-35
• 3.8.2 操作步驟35
• 3.9 統(tǒng)計學(xué)方法35-36
• 4 實驗結(jié)果36-43
• 4.1 建立流感模型實驗36-37
• 4.2 各模型組小鼠的體征變化37
• 4.3 肺部T-bet和ROR-γt的表達(dá)情況37
• 4.4 胸腺T-bet、ROR-γ 和Foxp3的表達(dá)情況37-39
• 4.5 脾臟T-bet、ROR-γ 和Foxp3的表達(dá)情況39-40
• 4.6 腸道局部的變化情況40-42
• 4.7 腸道菌群變化42-43
• 5 討論43-48
• 5.1 流感病毒感染在肺部引起的炎癥43-44
• 5.2 流感感染引起各器官中炎癥細(xì)胞的變化44-46
• 5.2.1 各器官中Th1細(xì)胞的變化44-45
• 5.2.2 各器官中Th17細(xì)胞的變化45
• 5.2.3 各器官中Treg細(xì)胞的變化45-46
• 5.2.4 小結(jié)46
• 5.3 流感感染病毒對腸道菌群的影響46
• 5.4 流感感染引起腹瀉的原因46-47
• 5.5 流感治療47-48
• 6 結(jié)論48-49
• 7 參考文獻(xiàn)49-56
• 8 附錄56-57
• 在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參加的科研項目57-58
• 致謝58

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 毛萌;兒童腸道微生態(tài)系統(tǒng)的特點與疾病[J];臨床兒科雜志;2005年10期

2 王賽;周李;康蓮蓮;楊榮;劉群;;抗病毒中藥復(fù)方制劑對雛雞IFN-γ水平影響的研究[J];西南民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2014年01期

  本文關(guān)鍵詞：流感病毒感染對腸道的影響及其致腹瀉原因初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：366947