本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞鈣通道的表達及維拉帕米對其免疫功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：結(jié)核病(Tuberculosis,TB)是嚴(yán)重危害人類健康的主要傳染性疾病,在本世紀(jì)仍然是全球關(guān)注的公共衛(wèi)生和社會問題。從使用抗結(jié)核藥治療開始,就出現(xiàn)了有關(guān)結(jié)核耐藥的報道,但是并沒有引起人們足夠的重視。近年來,由于耐多藥結(jié)核病(Multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)導(dǎo)致的死亡率不斷上升,研制有效的抗結(jié)核藥物已迫在眉睫。維拉帕米(Verapamil,VP)是一種苯烷胺類鈣通道阻滯劑,是L-型鈣通道(L-type calcium channel,LTCC)的特異性阻滯劑,與LTCC的α1亞基受體結(jié)合,降低鈣通道的開放率。在臨床上,它主要用于心血管系統(tǒng)疾病的治療。近年來研究發(fā)現(xiàn)維拉帕米在肺結(jié)核的聯(lián)合化療中顯示出潛在的治療價值,它能增強化療的效果,縮短療程,并降低耐藥率,也有充分的研究數(shù)據(jù)表明LTCC是一個極具前景的抗結(jié)核藥治療靶點,已成為一個新藥研究方向。本研究應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription-Polymerase chain reaction,RT-PCR)半定量技術(shù)檢測巨噬細(xì)胞在結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)感染情況下,巨噬細(xì)胞(Macrophage,MΦ)鈣通道表達變化的規(guī)律,并研究維拉帕米對巨噬細(xì)胞免疫功能的影響。了解M.tb感染的巨噬細(xì)胞在不同濃度的維拉帕米作用下,促炎基因表達和炎性相關(guān)細(xì)胞因子的分泌情況。一、結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞鈣通道的表達將56只小鼠隨機分為七組,每組8只,用M.tb強毒株H37Rv、弱毒株H37Ra、卡介苗(Mycobacterium bovis bacille Calmette-Guerin,BCG)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)分別感染小鼠24小時后,腹腔灌洗收獲巨噬細(xì)胞,用RT-PCR半定量技術(shù)檢測巨噬細(xì)胞LTCC mRNA的表達,結(jié)果顯示M.tb感染后巨噬細(xì)胞LTCC在基因水平表達增加,與正常對照組和S.aureus感染組相比差異顯著(p0.05),金黃色葡萄球菌感染的巨噬細(xì)胞ltcc在基因水平表達與正常對照組相比無顯著變化(p0.05)。二、維拉帕米對巨噬細(xì)胞免疫功能的影響將60只小鼠隨機分為兩組,一組為正常對照組,另一組為m.tbh37rv感染組,飼養(yǎng)24小時后進行腹腔灌洗收獲巨噬細(xì)胞,將收獲的正常組和感染組巨噬細(xì)胞均隨機分為9組,分別加入濃度為0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml的維拉帕米,培養(yǎng)細(xì)胞24小時后,收集細(xì)胞,提取rna,應(yīng)用rt-pcr半定量技術(shù)檢測巨噬細(xì)胞il-12和核因子-κb(nuclearfactor-kappab,nf-κb)的mrna表達水平。收集巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清液和細(xì)胞裂解液,通過elisa方法檢測巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子il-12(p40)、腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor,tnf-α)、il-1β和細(xì)胞裂解液中nf-κbp65(ps536)、nf-κbp65(total)含量。結(jié)果顯示:與無維拉帕米作用的正常組比較,感染組巨噬細(xì)胞il-12和nf-κbmrna表達水平顯著增高(p0.05),巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中il-12(p40)的含量和巨噬細(xì)胞裂解液中nf-κbp65(ps536)、nf-κbp65(total)的含量也顯著增高(p0.05);當(dāng)加入的維拉帕米在一定濃度范圍內(nèi),感染組巨噬細(xì)胞il-12和nf-κbmrna的表達、巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中il-12(p40)的含量和巨噬細(xì)胞裂解液中nf-κbp65(ps536)、nf-κbp65(total)的含量是增加的,當(dāng)維拉帕米濃度≥50μg/ml時,這些基因的表達和細(xì)胞因子的分泌與無維拉帕米作用的正常組相比,無顯著差異(p0.05)。與無維拉帕米作用的正常組相比,感染組分泌的il-1β和tnf-α水平都顯著增高(p0.01)。感染組分泌的il-1β和tnf-α隨著維拉帕米濃度的增加呈劑量依賴性遞減。當(dāng)維拉帕米的濃度≥25μg/ml時,感染組il-1β和tnf-α與無維拉帕米作用的正常組相比,無明顯差異(p0.05)。維拉帕米對正常細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌影響較少。上述結(jié)果表明,在m.tb感染情況下,巨噬細(xì)胞的ltcc表達增加,il-12和nf-κb無論在基因水平還是在細(xì)胞水平表達都顯著增加,il-1β和tnf-α的分泌也顯著增多。一定濃度范圍內(nèi)的鈣通道阻滯劑維拉帕米作用于巨噬細(xì)胞,其il-12和nf-κb無論在基因水平還是在細(xì)胞水平都隨著維拉帕米濃度的升高而增加;但IL-1β和TNF-α的分泌隨著維拉帕米濃度的升高而降低,且IL-1β和TNF-α的降低有劑量依賴性�？梢�,鈣通道阻滯能影響感染巨噬細(xì)胞的免疫能力。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核分枝桿菌 巨噬細(xì)胞 L-型電壓門控鈣離子通道 維拉帕米 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R52
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 英文縮寫11-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-26
• 結(jié)果26-30
• 附圖30-38
• 附表38-43
• 討論43-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻50-56
• 綜述 電壓門控鈣離子通道調(diào)控免疫細(xì)胞對結(jié)核分枝桿菌感染的研究進展56-64
• 參考文獻61-64
• 致謝64-65
• 個人簡歷65

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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2 柳麓];張麗;劉秀芬;宋鄂;;維拉帕米在眼科常見疾病中的應(yīng)用研究概述[J];吉林醫(yī)學(xué);2010年05期

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  本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞鈣通道的表達及維拉帕米對其免疫功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：362918