發(fā)布時(shí)間：2017-05-13 04:08

  本文關(guān)鍵詞：IFN-β及IRF-7在急性HBV感染小鼠模型中的表達(dá)分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)感染的清除機(jī)制目前還不十分清楚。現(xiàn)已知,病毒感染早期干擾素(Interferon, IFN)的產(chǎn)生是機(jī)體清除病毒的重要環(huán)節(jié),而干擾素調(diào)節(jié)因子-7(Interferon regulatory factor-7, IRF-7)是IFN誘生的關(guān)鍵因子之一。因此本文擬通過構(gòu)建急性HBV感染小鼠模型,觀察IFN-β及IRF-7的mRNA和蛋白表達(dá)水平在肝組織中的變化,分析其表達(dá)變化與HBV感染的關(guān)系,以期探討其在HBV感染清除機(jī)制中的作用。方法：1.用高壓水動(dòng)力法經(jīng)小鼠尾靜脈注射HBV基因組1.3倍體真核表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA3.1-HBV1.3)構(gòu)建急性HBV感染小鼠模型,以注射空載體pcDNA3.1做對(duì)照。2.用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)小鼠血清中HBsAg及HBeAg水平。3.酶免疫組化法檢測(cè)小鼠肝臟組織中HBsAg及HBcAg的表達(dá)。4.逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR (RT-qPCR)法檢測(cè)正常未注射組(NC組)、模型組(pHBV組)及空載體組(pcDNA組)不同時(shí)間點(diǎn)小鼠肝臟中IFN-β、IRF-7等基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量。5. ELISA檢測(cè)各組小鼠肝臟中IFN-p蛋白含量。6. Western Blot檢測(cè)各組小鼠肝臟中IRF-7的蛋白表達(dá)水平。7. SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件作多組均數(shù)的方差分析及變量間的相關(guān)性分析。結(jié)果：1.在HBV質(zhì)粒注射后,小鼠血清中HBsAg水平在第6h為陰性,然后上升,至第24h為陽性(113.89±31.06 COI) (1 COI為陽性),在第48h達(dá)到峰值(303.40±74.105 COI),隨后逐漸降低；血清HBeAg水平在第24h為陽性(31.06±6.87 COI),并達(dá)峰值,然后逐漸降低。NC組及pcDNA組小鼠血清中HBsAg及HBeAg均為陰性。2.pHBV組小鼠在質(zhì)粒注射后第6h即可檢測(cè)到肝臟內(nèi)HBsAg及HBcAg的表達(dá),在12h時(shí)表達(dá)HBsAg或HBcAg的肝細(xì)胞陽性率達(dá)峰值(分別為20%或18%),至第5d逐漸消失。NC組及pcDNA組小鼠肝組織內(nèi)]HBsAg及HBcAg均為陰性。3.pHBV組小鼠肝臟IFN- β mRNA表達(dá)在第6h升高(為NC組3.4倍),第12h達(dá)最高(為NC組66.5倍),隨后下降,在6h、12h或24h時(shí)與NC或pcDNA組的差異均有顯著性(P0.05)。同時(shí),pHBV組小鼠肝臟IFN-β蛋白表達(dá)在12h升高(為NC組8.7倍),與pcD NA組與NC組相比差異有顯著性(P0.05)。pcDNA組與NC組IFN-β mRNA或蛋白表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均無顯著變化(P0.05)。4.pHBV組小鼠肝臟IRF-7的mRNA及蛋白表達(dá)水平在第6h、12h、24h均顯著高于pcDNA組及NC組(P0.05)。且pHBV組IRF-7mRNA或蛋白的表達(dá)在12h達(dá)到最高(為NC組5.3倍或4.4倍),隨后逐漸下降,至第48h與對(duì)照組相比已無顯著性差異(P0.05)。pcDNA組與NC組相比各時(shí)間點(diǎn)均無顯著變化(P0.05)。5.pHBV組小鼠肝臟中IFN-β mRNA表達(dá)與HBsAg或HBcAg表達(dá)肝細(xì)胞的陽性率相關(guān)(p=0.01或p=0.02); IRF-7 mRNA表達(dá)與HBsAg或HBcAg表達(dá)肝細(xì)胞的陽性率相關(guān)(p0.001)；IFN-β mRNA表達(dá)與IRF-7 mRNA表達(dá)相關(guān)(p=0.004)。結(jié)論：成功構(gòu)建了急性HBV感染小鼠模型,該模型肝臟組織中IFN-β和IRF-7 mRNA及蛋白表達(dá)變化與肝臟內(nèi)HBV抗原表達(dá)變化趨勢(shì)一致。提示肝臟內(nèi)IRF-7及IFN-β可能參與了HBV的急性感染清除過程。
【關(guān)鍵詞】：干擾素-β 干擾素調(diào)節(jié)因子-7 乙型肝炎病毒 急性感染 小鼠動(dòng)物模型
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R512.62;R-332
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一節(jié) IFN-β在急性HBV感染小鼠模型中的表達(dá)分析15-29
• 1 材料15-18
• 2 方法18-23
• 3 結(jié)果23-29
• 第二節(jié) IRF-7在急性HBV感染小鼠模型中的表達(dá)分析29-36
• 1 材料29
• 2 方法29-32
• 3 結(jié)果32-36
• 全文討論36-38
• 全文總結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 文獻(xiàn)綜述42-50
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 致謝50-51
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文51

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  本文關(guān)鍵詞：IFN-β及IRF-7在急性HBV感染小鼠模型中的表達(dá)分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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