目的:探討micro RNA-141（miR-141）在Hepatitis C virus（HCV）感染過程中發(fā)揮的作用。主要從兩方面進行研究,miR-141對HCV進入宿主細胞的調(diào)節(jié)機制及對interferonβ（IFNβ）信號通路的改變及HCV復(fù)制的影響。方法:利用q RT-PCR檢測miR-141及相關(guān)基因的m RNA水平;Western blot和免疫組化等方法檢測EPH receptor A2（Eph A2）及相關(guān)基因的蛋白表達;利用HCV病毒顆粒檢測試劑盒測定制備的病毒滴度以及經(jīng)處理的細胞培養(yǎng)上清中釋放的病毒顆粒的滴度;利用免疫熒光檢測進入細胞中的HCV顆粒、細胞表面受體的表達及共定位情況;用Target Scan、Pic Tar、star Base等在線軟件預(yù)測miR-141的靶基因;利用UCSC、Reg RNA2.0等在線軟件預(yù)測靶基因的啟動子序列,并尋找靶基因與miR-141結(jié)合的位點;利用雙熒光素酶報告基因試驗驗證miR-141與Eph A2之間的靶向關(guān)系及IFNβ和NF-κB p65的活性;利用si RNA敲低Eph A2和TLR8,分析敲低Eph A2與過表達m... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

miR-141與HCV感染的關(guān)系

華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文29圖1-2EphA2是miR-141的特異性靶點。（A）TargetScan預(yù)測miR-141與EphA2的結(jié)合位點；（B）雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測miR-141與EphA2的特異性關(guān)系；（C）qRT-PCR和Westernblot檢測過表達miR-141后EphA2的mRNA和蛋白水平；（D）qRT-PCR和Westernblot檢測HCV引起的肝癌及對應(yīng)的癌旁組織中EphA2的mRNA和蛋白水平；（E）免疫組化檢測HCV引起的肝癌組織及對應(yīng)的臨近癌旁組織中EphA2的表達。*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001。Fig1-3EphA2wasthespecifictargetofmiR-141.(A)BindingsiteofmiR-141in3’UTRofEphA2predictedbyTargetScan.(B)SpecificitybetweenmiR-141andEphA2bydualluciferaseactivityassays.(C)DetectionoftheexpressionofEphA2incellsstablyexpressingmiR-141byqRT-PCRandWesternblot(D)ExpressionofthemRNAandproteinlevelofEphA2inHCV-inducedHCCdetectedbyqRTPCRandWesternblot(E)ExpressionofEphA2inHCV-inducedHCCbyimmunohistochemistry.*,p<0.05;**,p<0.01;***,p<0.001.

敲低EphA2對HCV進入的影響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Huh7.5.1細胞感染HCV觀察干擾素治療后miRNA表達譜變化[J]. 魯兗,邢小康,宋廣忠,陳智.  浙江大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2011(06)

碩士論文
[1]miR-141對肝癌細胞Huh7遷移和對HCV復(fù)制能力影響的機制研究[D]. 徐正紅.華中科技大學(xué) 2012



本文編號：3578605